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[发明专利]表达羟基酪醇和羟基酪醇葡萄糖苷的大肠杆菌及构建方法及应用-CN201610158902.7有效
发明人：刘涛;殷华;庄以彬;李晓林;毕慧萍;马延和 -专利权人：中国科学院天津工业生物技术研究所
申请日： 2016-03-18 - 公布日： 2021-02-19 - 主分类号： C12N1/21 文献下载
摘要：本发明公开了表达羟基酪醇和羟基酪醇葡萄糖苷的大肠杆菌及构建方法及应用，一种表达羟基酪醇和羟基酪醇葡萄糖苷的大肠杆菌，所述大肠杆菌含有并能够表达ARO10、HpaBC和UGT基因。本发明的重组大肠杆菌酪氨酸通路相关基因进行了过表达，能够显著提高羟基酪醇、羟基酪醇‑3‑O‑β‑D‑葡萄糖苷和羟基酪醇‑4‑O‑β‑D‑葡萄糖苷的产量，其中羟基酪醇产量可达401mg/L、羟基酪醇‑3‑
表达羟基醇和葡萄糖苷大肠杆菌构建方法应用

[发明专利]一种表达热稳定型酪氨酸酚解酶的大肠杆菌及其应用-CN201910313671.6有效
发明人：周景文;堵国成;陈坚;韩红梅;曾伟主 -专利权人：江南大学
申请日： 2019-04-18 - 公布日： 2020-11-03 - 主分类号： C12N9/88 文献下载
摘要：本发明公开了一种表达热稳定型酪氨酸酚解酶的大肠杆菌及其应用，属于生物工程技术领域。本发明以大肠杆菌BL21作为宿主，表达重组质粒pET‑28(a)‑TPL及25个酪氨酸酚解酶突变体，得到了含有突变质粒生产L‑DOPA的重组大肠杆菌，利用获得的重组菌全细胞转化生产L‑DOPA，其中表达pET‑28(a)‑TPL(E313M)的重组菌生产L‑DOPA产量达到54.9g/L，相比对照菌株提高了142.9％，其表达的酪氨酸酚解酶的在20℃，40℃，60℃条件下的半衰期分别提高至37.9min，17.1min，14.6min，为代谢工程改造大肠杆菌生产L‑DOPA奠定了基础。
一种表达稳定酪氨酸酚解酶大肠杆菌及其应用

[发明专利]细胞表面展示PET分解酶的重组大肠杆菌及构建及应用-CN201610912533.6有效
发明人：王泽方;杨海涛;王遨;王时超;董国修;何春霖;王浩栋;陈卓芝 -专利权人：天津大学
申请日： 2016-10-20 - 公布日： 2019-06-25 - 主分类号： C12N15/70 文献下载
摘要：本发明公开了细胞表面展示PET分解酶的重组大肠杆菌及构建及应用，其构建方法为：(1)化学合成锚定蛋白和PETase基因；(2)利用PCR将锚定蛋白和PETase基因连接，得到融合序列；(3)将融合序列连接到大肠杆菌表达载体上，得到融合表达载体；(4)将融合表达载体转入表达宿主大肠杆菌中，得到细胞表面展示PET分解酶的重组大肠杆菌。
构建细胞表面展示重组大肠杆菌锚定蛋白分解酶融合表达载体降解大肠杆菌表达生物催化活性大肠杆菌表达宿主分离纯化化学合成基因连接目的蛋白生长周期细胞表面序列连接野生菌株融合制备应用转入基因

[发明专利]抗菌肽Hclocidin18在大肠杆菌中的表达方法-CN201310639841.2无效
发明人：相兴伟;周宇芳;江玲丽;杨会成;孔寅飞;郑斌 -专利权人：浙江省海洋开发研究院
申请日： 2013-12-04 - 公布日： 2014-03-26 - 主分类号： C12N15/12 文献下载
摘要：本发明涉及生物技术及生物医药技术领域，特别涉及一种抗菌肽Hclocidin18在大肠杆菌中的表达方法.一种抗菌肽Hclocidin18在大肠杆菌中的表达方法，其特征在于包括如下步骤：a、质粒构建：采用大肠杆菌进行重组质粒构建，以家蚕质型多角体病毒BmCPV的多角体蛋白作为融合伴侣；b、诱导表达；c、重组质粒编码的融合蛋白的纯化；d、融合蛋白的裂解和抗菌肽Hclocidin18的收集。本发明以家蚕质型多角体病毒（BmCPV）的多角体蛋白作为融合伴侣在大肠杆菌中成功表达了抗菌肽Hclocidin18，同时利用多角体蛋白的碱溶解特性实现了抗菌肽Hclocidin18的高效回收。
抗菌 hclocidin18 大肠杆菌中的表达方法

[发明专利]可表达和分泌β－半乳糖苷酶的大肠杆菌－乳酸菌穿梭质粒及其构建方法与应用-CN200710048430.0无效
发明人：汪川;张朝武;刘衡川;余倩;许欣;裴晓方;王国庆;林怡伶 -专利权人：四川大学
申请日： 2007-02-08 - 公布日： 2007-09-12 - 主分类号： C12N15/63 文献下载
摘要：一种可表达和分泌β－半乳糖苷酶的大肠杆菌－乳酸菌穿梭质粒，所含基因由编码β－半乳糖苷酶的基因及该基因上游含SD位点的调控序列组成。实验证明，上述重组质粒可转化乳酸乳球菌，在大肠杆菌和乳酸乳球菌中高效表达非融合β－半乳糖苷酶，在β－半乳糖苷酶制备和构建可表达β－半乳糖苷酶的乳酸菌株中应用。构建方法包括以下步骤：以德氏乳杆菌保加利亚亚种基因组DNA为模板，扩增得到含上游调控序列的β－半乳糖苷酶基因；将上述扩增得到的β－半乳糖苷酶基因双酶切后与用同种酶双酶切并去磷酸化的载体连接并转化感受态大肠杆菌；筛选阳性大肠杆菌，提取阳性大肠杆菌中重组质粒酶切鉴定并对插入序列进行测序。
表达分泌半乳糖大肠杆菌乳酸菌穿梭质粒及其构建方法应用

[发明专利]一种红米稻血红素结合蛋白的原核细胞高效表达方法-CN202210072817.4在审
发明人：方庆;黄卉;王海洋 -专利权人：湖北民族大学
申请日： 2022-01-21 - 公布日： 2022-03-25 - 主分类号： C07K14/415 文献下载
摘要：本发明公开了一种红米稻血红素结合蛋白的原核细胞高效表达方法，涉及原核细胞表达技术领域，包括以下步骤：植物材料准备，对红米稻进行无菌消毒，进行培养箱培养，取少量无菌红米稻幼苗样品，采用Trizol法提取红米稻总RNA；RT‑PCR扩增目的基因，目的基因与重组表达载体连接，重组载体转化大肠杆菌细胞，目的蛋白大肠杆菌诱导表达与检测，本发明采用现代基因工程策略，通过对红米稻总RNA提取、RT‑PCR扩增目的基因。将目的基因与重组表达载体连接，再重组载体转化大肠杆菌细胞，实现红米稻中一个血红素结合相关的目的蛋白基因在原核细胞大肠杆菌中高效表达，为该类型植物源性血红素结合相关蛋白的大量获得及其活性鉴别和运用提供了关键技术条件和基础
一种红米稻血红素结合蛋白原核细胞高效表达方法

[发明专利]一种基于大肠杆菌原核表达系统的制备死亡素的方法-CN201210507640.2无效
发明人：陈利淼;王涛;刘云龙;任飞;吕正兵 -专利权人：杭州蚕宝生物技术有限公司
申请日： 2012-11-30 - 公布日： 2013-02-27 - 主分类号： C12N15/12 文献下载
摘要：本发明涉及到用大肠杆菌的原核表达系统制备死亡素，属于基因工程技术领域。本发明一种重组基因，包括依次相连的融合伴侣基因序列、甲硫氨酸密码子、死亡素重复序列和终止密码子。本发明还提供含上述重组基因的原核表达质粒以及含该原核表达质粒的大肠杆菌。本发明还提供一种基于大肠杆菌原核表达系统的制备死亡素的方法，其特征在于，包括如下步骤：（1）诱导上述大肠杆菌表达重组蛋白；（2）分离纯化重组蛋白；（3）用溴化氰处理，将重组蛋白切割成多个独立完整的死亡素本发明的创新之处在于，通过溴化氰裂解，可一次性获得多个独立完整的死亡素；而且死亡素表达量高。
一种基于大肠杆菌表达系统制备死亡方法

[发明专利]利用葡萄糖生产羟基酪醇的重组大肠杆菌及重组方法及应用-CN201510242626.8有效
发明人：刘涛;李晓林;白艳芬;毕慧萍;庄以彬;马延和 -专利权人：中国科学院天津工业生物技术研究所
申请日： 2015-05-13 - 公布日： 2017-12-12 - 主分类号： C12N15/70 文献下载
摘要：本发明公开了利用葡萄糖生产羟基酪醇的重组大肠杆菌及构建方法及应用，方法为，以SEQ ID NO.1、2为引物，以大肠杆菌BW25113基因组DNA为模板，PCR扩增HpaBC基因，连入载体pTrcHisB，得到中间质粒，以中间质粒为模板，以SEQ ID No.3、2为引物，PCR扩增，连入质粒pTrcHisB‑ARO10，得到表达载体pTrcHisB‑ARO10‑HpaBC并将该载体与质粒pBb3共转入大肠杆菌菌株BMGA，得到重组大肠杆菌。本发明的重组大肠杆菌含有来自酿酒酵母的ARO10基因及来自大肠杆菌内源的HpaBC基因。能够显著提高羟基酪醇的产量。
利用葡萄糖生产羟基重组大肠杆菌方法应用

[发明专利]一种大肠杆菌高效生产脂肪酸的系统及其构建方法-CN201210376058.7有效
发明人：马钢;贺林;王右;吴宇奇;郭华庆;尹若楠;索洋;奚瑞;于一能;吴佳杰;华楠;张悦涵;靳振明;张少博 -专利权人：上海交通大学
申请日： 2012-09-28 - 公布日： 2013-01-30 - 主分类号： C12N1/21 文献下载
摘要：本发明公开了一种大肠杆菌高效生产脂肪酸的系统及其构建方法和应用。本发明提供的大肠杆菌高效生产脂肪酸的系统的构建方法是，构建大肠杆菌脂肪酸代谢途径关键蛋白FabI、FabG、FabZ、TesA与膜蛋白Lgt、二聚体蛋白GBD Domain、GBD Ligand、SH3Domain、SH3Ligand的融合蛋白，将该系列蛋白在大肠杆菌中共表达使其定位并聚集于细胞膜上，利用该系统进行发酵培养可使大肠杆菌菌体以及培养基中的棕榈酸(C-16)产量及总脂肪酸产量相较于野生型大肠杆菌有显著提高
一种大肠杆菌高效生产脂肪酸系统及其构建方法

[发明专利]提高微生物转谷氨酰胺酶在大肠杆菌中可溶性表达的方法-CN201410244963.6在审
发明人：李荣杰;徐斌;常珠侠;许鹏 -专利权人：安徽丰原发酵技术工程研究有限公司
申请日： 2014-06-04 - 公布日： 2014-10-08 - 主分类号： C12N9/10 文献下载
摘要：本发明提供一种提高微生物转谷氨酰胺酶在大肠杆菌中可溶性表达的方法，其是将pET-MTG与pA-GESP两种质粒共转化大肠杆菌DE3，诱导后的上清中，微生物转谷氨酰胺酶呈可溶性表达。本发明利用pET系统高效表达MTG，并建立了分子伴侣共表达体系，提高MTG表达产物的可溶性，对其表达产物进行SDS-PAGE分析，结果表明，本发明可以提高MTG在大肠杆菌中的可溶性表达，且表达效果明显，
提高微生物谷氨酰胺大肠杆菌可溶性表达方法

[发明专利]一种异源可溶性表达肝靶向干扰素的方法-CN201510923106.3在审
发明人：卢雪梅;朱家勇;金小宝 -专利权人：广东药学院
申请日： 2015-12-14 - 公布日： 2016-05-25 - 主分类号： C12N15/70 文献下载
摘要：本发明公开了一种异源可溶性表达肝靶向干扰素的方法，具体步骤为S1.将肝靶向干扰素突变成SEQ ID NO:2所示的突变肝靶向干扰素；S2.将编码SEQ ID NO:2所示突变肝靶向干扰素基因的核苷酸序列中的大肠杆菌稀有密码子替换成大肠杆菌非稀有密码子，优化后的编码SEQ ID NO:2所示突变肝靶向干扰素基因的核苷酸序列如SEQ ID NO:4所示；S3构建表达突变肝靶向干扰素的重组表达载体，将重组表达载体导入大肠杆菌，获得可溶性表达突变肝靶向干扰素的重组大肠杆菌菌株，诱导重组大肠杆菌表达，获得可溶性表达的突变肝靶向干扰素。本发明首次实现了肝靶向干扰素的可溶性表达，表达产物无需变复性等复杂工艺即可获得高纯度目的蛋白，有助于减化制备工艺、降低生产成本；同时通过对肝靶向干扰素进行改造，获得生物学活性更强的突变肝靶向干扰素。
一种可溶性表达靶向干扰素方法

[发明专利]重组大肠杆菌工程菌及利用其制备S-腺苷甲硫氨酸的方法-CN202010250598.5有效
发明人：周晶辉;许岗;黄斌;曾红宇;刘洋;田艳 -专利权人：湖南福来格生物技术有限公司
申请日： 2020-04-01 - 公布日： 2021-08-20 - 主分类号： C12N1/21 文献下载
摘要：本发明属于酶工程技术领域，涉及重组大肠杆菌工程菌及利用其制备S‑腺苷甲硫氨酸的方法。所述的重组大肠杆菌工程菌含有重组表达载体，所述的重组表达载体含有表达S‑腺苷甲硫氨酸合成酶的基因和表达ATP合成酶的基因。相比传统的发酵法和体外酶催化合成方法，利用本发明的重组大肠杆菌工程菌及利用其制备S‑腺苷甲硫氨酸的方法，能够更简单、更低成本、高产率的制备S‑腺苷甲硫氨酸。
重组大肠杆菌工程利用制备腺苷甲硫氨酸方法

[发明专利]一种检测食品中大肠杆菌胞内β-葡萄糖苷酸酶的双抗体夹心法-CN201310691119.3有效
发明人：匡华;胥传来;王文彬;徐丽广;马伟;刘丽强;宋珊珊;胡拥明 -专利权人：江南大学
申请日： 2013-12-17 - 公布日： 2014-04-02 - 主分类号： G01N33/577 文献下载
摘要：一种检测食品中大肠杆菌胞内β-葡萄糖苷酸酶的双抗体夹心法，属于免疫分析技术领域。本发明应用大肠杆菌β-葡萄糖苷酸酶（EC3.2.1.31）免疫7周龄BALB/c小鼠，经融合、筛选得10株单抗，分别标记HRP，并配对。以CGMCC No.7209为包被抗体和CGMCC No.7211为酶标抗体，以重组表达的大肠杆菌β-葡萄糖苷酸酶为标准品建立夹心ELISA分析方法。本法通过裂解大肠杆菌ATCC25922检测胞内β-葡萄糖苷酸酶，实现大肠杆菌检测，LOD为3.27*10^4cfu/mL。本法首次制备了大肠杆菌的标志物β-葡萄糖苷酸酶的单抗并建立了检测大肠杆菌的双抗夹心法，本法与沙门氏菌、E.coli、阪崎肠杆菌、金黄色葡萄球菌、单增李斯特菌无交叉反应，为食品中大肠杆菌的检测提供了新的检测手段
一种检测食品大肠杆菌葡萄糖苷抗体夹心

[发明专利]代谢赖氨酸的工程菌及其构建方法与应用-CN202210754123.9在审
发明人：吕军鸿;耿枫;吴明玉;王亚迪 -专利权人：滨州医学院
申请日： 2022-06-28 - 公布日： 2022-09-02 - 主分类号： C12N1/21 文献下载
摘要：所述工程菌是以大肠杆菌为出发菌株，通过敲除ldcC1和ldcC2基因，并在大肠杆菌中表达来自酿酒酵母菌BY4741的LKR和SDR基因构建得到的；或者，所述工程菌是以大肠杆菌为出发菌株，通过敲除ldcC1和ldcC2基因，并在大肠杆菌中表达来自酿酒酵母菌BY4741的lys5和lys2基因构建得到的。本发明通过改造源自酵母菌科的酵母氨酸合成酶和酵母氨酸脱氢酶，并将这两个基因转入大肠杆菌中。使其能够将赖氨酸转化为酵母氨酸再进一步转化为氨基己酸，从而在大肠杆菌中实现赖氨酸的快速代谢。
代谢赖氨酸工程及其构建方法应用

[发明专利]一种2，3-环氧角鲨烯的生物合成方法-CN201310724660.X有效
发明人：郭小飞;黄亦钧;王华明 -专利权人：青岛蔚蓝生物集团有限公司
申请日： 2013-12-24 - 公布日： 2014-04-02 - 主分类号： C12P17/02 文献下载
摘要：本发明提供了一种2，3-环氧角鲨烯的生物合成方法，是同时在大肠杆菌（Escherichia coli）中表达角鲨烯合成酶和角鲨烯环氧化酶，再将该大肠杆菌发酵制备2，3-环氧角鲨烯。本发明利用基因工程技术手段，构建了包含角鲨烯合成酶基因和角鲨烯环氧化酶基因的大肠杆菌工程菌，实现角鲨烯合成酶和角鲨烯环氧化酶在大肠杆菌体内的共表达，其中角鲨烯合成酶可以在大肠杆菌体内催化生产角鲨烯，而角鲨烯环氧化酶可以将底物角鲨烯催化合成利用该大肠杆菌工程菌能够大大提高2，3-环氧角鲨烯的产量，也为原人参二醇及羊毛甾醇等天然化合物的大规模工业化生产奠定了基础。
一种环氧角鲨烯生物合成方法