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[发明专利]一种可以利用葡萄糖高效合成2-KLG的氧化葡萄糖酸杆菌的构建及其应用-CN202310229184.8在审
发明人：周景文;陈坚;李光;曾伟主;李江华 -专利权人：江南大学
申请日： 2023-03-10 - 公布日： 2023-10-27 - 主分类号： C12N1/21 文献下载
摘要：本发明公开了一种可以利用葡萄糖高效合成2‑KLG的氧化葡萄糖酸杆菌的构建及其应用，属于基因工程及生物工程技术领域。本发明通过在氧化葡萄糖酸杆菌ATCC9937中敲除醛酮还原酶psAKR，整合表达2,5‑DKG转运蛋白KgtpA、基因组水平增加了2,5‑DKG还原酶DKGRA的拷贝数，同时强化了工程菌株的葡萄糖转运系统，获得能够通过葡萄糖直接合成2‑KLG的重组氧化葡萄糖酸杆菌GKLG11。所述氧化葡萄糖酸杆菌能够通过通过葡萄糖直接一步发酵合成2‑KLG，因而所述重组氧化葡萄糖酸杆菌在化妆品、纺织品、食品领域具有重要作用。
一种可以利用葡萄糖高效合成 klg 氧化杆菌构建及其应用

[发明专利]合成阿福豆素和儿茶素的酿酒酵母菌株及其应用-CN202111106294.2有效
发明人：周景文;孙程程;徐沙;曾伟主;余世琴;陈坚 -专利权人：江南大学
申请日： 2021-09-22 - 公布日： 2023-10-27 - 主分类号： C12N1/19 文献下载
摘要：本发明公开了合成阿福豆素和儿茶素的酿酒酵母菌株及其应用，属于基因工程技术领域。将F3H，F3’H和CPR整合至酿酒酵母基因组，得到了阿福豆素和儿茶素前体的从头合成菌株，筛选了最好催化活性的FaDFR和的VvLAR，通过连接肽的使用极大地促进了向阿福豆素和儿茶素的代谢通量，利用GAL7p和ERG1p启动子启动基因的表达，最后在阿福豆素从头合成菌株AF12中过表达TYR1，在儿茶素从头合成菌株AF13中过表达TYR1、ARO8和ZWF1，在摇瓶水平上产量分别为64 mg/l、41 mg/L，经过5 L发酵罐的优化，最终可使阿福豆素与儿茶素的产量分别达到500.5 mg/L、321.3 mg/L。
合成阿福豆素儿茶素酿酒酵母菌株及其应用

[发明专利]一组用于酿酒酵母多拷贝整合的质粒工具包-CN202110659681.2有效
发明人：周景文;高松;曾伟主;陈坚;沐万孟 -专利权人：江南大学
申请日： 2021-06-11 - 公布日： 2023-10-27 - 主分类号： C12N15/81 文献下载
摘要：本发明公开了一组用于酿酒酵母多拷贝整合的质粒工具包，属于基因和代谢工程领域。本发明构建和验证的多拷贝整合质粒工具包，可以通过一次转化在酿酒酵母基因组上实现多个外源基因的多拷贝、稳定的、整合型表达。并且可以通过选择不同的筛选标签在不同的Ty位点，实现多批次、多基因、稳定的、整合型表达外源基因。
一组用于酿酒酵母拷贝整合质粒工具包

[发明专利]一种适用于谷氨酸棒杆菌的高强度启动子及应用-CN202010263319.9有效
发明人：周景文;陈坚;李宁;曾伟主;堵国成 -专利权人：江南大学
申请日： 2020-04-07 - 公布日： 2023-10-03 - 主分类号： C12N15/113 文献下载
摘要：本发明公开了一种适用于谷氨酸棒杆菌的高强度启动子及应用，属于生物工程技术领域。本发明从谷氨酸棒杆菌中筛选获得了18个可提高蛋白表达强度的启动子。本发明筛选获得的启动子可导入至生产氨基酸的微生物中，经证实，在谷氨酸棒杆菌中，该启动子可强化基因的表达量，使其涉及的目标产物产量提高2～10倍甚至更高，具有重要的工业化应用价值。
一种适用于谷氨酸杆菌强度启动子应用

[发明专利]一种生产2-KLG的葡萄糖酸杆菌一步菌底盘细胞库的构建方法-CN202210167094.6有效
发明人：周景文;秦志杰;李江华;陈坚;曾伟主;余世琴;堵国成 -专利权人：江南大学
申请日： 2022-02-23 - 公布日： 2023-10-03 - 主分类号： C12N1/21 文献下载
摘要：本发明公开了一种生产2‑KLG的葡萄糖酸杆菌一步菌底盘细胞库的构建方法，属于基因工程及生物工程技术领域。本发明通过对含有SNDHSDH的G.cerinus CGMCC 1.110与G.oxydans WSH‑004进行蛋白组分析，并对葡萄糖酸杆菌WSH‑003、CGMCC 1.49、CGMCC 1.110中SNDHSDH的功能验证，鉴定了SNDHSDH表达量低是多数葡萄糖酸杆菌不产2‑KLG的关键因素，进而通过过表达葡萄糖酸杆菌内源SNDHSDH构建了丰富的一步合成2‑KLG的底盘细胞库，为后续构建高产2‑KLG的葡萄糖酸杆菌提供了可选择的底盘细胞。
一种生产 klg 葡萄糖杆菌一步底盘细胞构建方法

[发明专利]一种提高葡萄糖酸杆菌中2-KLG产量的两阶段发酵方法-CN202210167872.1有效
发明人：周景文;秦志杰;李江华;陈坚;曾伟主;余世琴;堵国成 -专利权人：江南大学
申请日： 2022-02-23 - 公布日： 2023-10-03 - 主分类号： C12N1/21 文献下载
摘要：本发明公开了一种提高葡萄糖酸杆菌中2‑KLG产量的两阶段发酵方法，属于生物工程技术领域。本发明结合葡萄糖酸杆菌最适生长条件与限速酶SDH适宜的催化条件，开发了两阶段发酵策略，本发明通过控制发酵过程的前48h pH为5.8～6.2、温度为28～32℃，第49‑168hpH为6.8～7.2、温度为33～35℃，使得2‑KLG产量相比于单阶段发酵提升了34.2％，达到52.2g/L。
一种提高葡萄糖杆菌 klg 产量阶段发酵方法

[发明专利]一种生产7-O甲基圣草酚的重组大肠杆菌及应用-CN202210190961.8有效
发明人：周景文;孙秋梦;徐沙;曾伟主;余世琴;陈坚 -专利权人：江南大学
申请日： 2022-02-23 - 公布日： 2023-10-03 - 主分类号： C12N1/21 文献下载
摘要：本发明公开了一种生产7‑O甲基圣草酚的重组大肠杆菌及应用，属于基因工程和生物工程技术领域。本发明在大肠杆菌中异源表达来源于Perillafrutescens的甲氧基转移酶基因，实现了7‑O甲基圣草酚的合成。并通过内源强化甲硫氨酸合成途径、动态调控ATP、强化5’‑磷酸吡哆醛的合成进而整体调控转硫路径、分批添加底物等多种方式，提高了7‑O甲基圣草酚的积累量，最佳工程菌株7‑O甲基圣草酚产量达到306mg/L，为工业化生产7‑O甲基圣草酚提供了一种新的方法。
一种生产甲基圣草酚重组大肠杆菌应用

[发明专利]一种可积累莽草酸的大肠杆菌的构建及其应用-CN202210261054.8有效
发明人：周景文;陈坚;刘东明;曾伟主;余世琴;堵国成 -专利权人：江南大学
申请日： 2022-03-16 - 公布日： 2023-10-03 - 主分类号： C12N1/21 文献下载
摘要：本发明公开了一种可积累莽草酸的大肠杆菌的构建及其应用，属于基因工程及生物工程技术领域。本发明通过在大肠杆菌中敲除莽草酸激酶(aroL和aroK)阻止莽草酸的降解，然后再敲除磷酸烯醇式丙酮酸‑糖磷酸转移酶系统操纵子中的基因ptsI、葡萄糖转运酶基因ptsG，同时在基因组上用强的内源启动子Pssra‑infc替换葡萄糖‑6‑磷酸脱氢酶(zwF)的本地启动子，最后再通过质粒表达强化关键基因酶tktA的表达，弱化aroK的表达，进一步提高莽草酸的积累。将本发明构建得到的重组大肠杆菌在发酵罐体系中发酵生产莽草酸，发酵78h，可以积累63.494g/L的莽草酸，对工业化生物法生产莽草酸具有重要的意义。
一种积累莽草大肠杆菌构建及其应用

[发明专利]一种合成香兰素的重组大肠杆菌及其应用-CN202310859784.2在审
发明人：周景文;乌仁嘎;曾伟主;陈坚 -专利权人：江南大学
申请日： 2023-07-13 - 公布日： 2023-09-15 - 主分类号： C12N1/21 文献下载
摘要：本发明公开了一种合成香兰素的重组大肠杆菌及其应用，属于基因工程及生物工程技术领域。本发明通过在大肠杆菌中敲除编码莽草酸脱氢酶的基因aroE和3个编码醛酮还原酶AKRs的基因dkgA、dkgB和yeaE，3个编码乙醇脱氢酶ADHs的基因yqhD、yahK和yjgB，并异源表达脱氢莽草酸脱水酶DSD、甲氧基转移酶LiOMT和羧酸还原酶NiCAR，获得能够合成香兰素的重组大肠杆菌K2。所述重组大肠杆菌能够通过基于廉价小分子葡萄糖作为前体合成香兰素，在化妆品、纺织品、食品领域具有重要作用。
一种合成香兰素重组大肠杆菌及其应用

[发明专利]一种合成赤霉素4的重组酿酒酵母菌株及其应用-CN202310606614.3在审
发明人：周景文;李珊;陈坚;曾伟主;高倩 -专利权人：江南大学
申请日： 2023-05-26 - 公布日： 2023-09-08 - 主分类号： C12N1/19 文献下载
摘要：本发明公开了一种合成赤霉素4的重组酿酒酵母菌株及其应用，属于基因工程与生物工程技术领域。本发明将关键基因KS整合于基因组位点表达，并将来源于藤仓赤霉菌的双功能二磷酸合成酶GfKS，来源于拟南芥的贝壳杉烷氧化酶AtKO、贝壳杉烯酸氧化酶AtKAO、GA碳3氧化酶AtC3ox和GA碳20氧化酶AtC20ox用于赤霉素4合成途径的构建，获得了能够生产赤霉素4的重组酿酒酵母。本发明还通过启动子的筛选及引入电子传递系统，并通过融合AtKO和AtKAO进一步提高了重组酿酒酵母的赤霉素4产量，使发酵120h的产量达165.4mg/L，为工业化生产赤霉素4奠定了基础。
一种合成赤霉素重组酿酒酵母菌株及其应用

[发明专利]一种基于深度学习的大肠杆菌启动子识别及强弱分类方法-CN202310575873.4在审
发明人：周景文;王兴隆;徐康杰;赵欣怡;陈坚;曾伟主 -专利权人：江南大学
申请日： 2023-05-22 - 公布日： 2023-09-05 - 主分类号： G16B40/00 文献下载
摘要：本发明公开了一种基于深度学习的大肠杆菌启动子识别及强弱分类方法，属于生物信息技术领域。所述方法包括：对基因序列进行数字化处理、对训练样本进行扩充、构建深度学习网络模型用于特征学习。本发明采用的残差网络结合自注意力机制，具有更深的网络深度并且可有效识别序列的小区段关键区域与全长序列的关联。相比于现有的采用一维卷积神经网络结合双向长短期记忆，其中，启动子真伪数据集仅包含6764个样本；启动子强弱数据集包含3382个样本。本发明旨在通过增加网络深度、数据集样本量来提高整体的判别精度，所构建的模型不仅可以用于启动子识别与强弱判定，且更有助于辅助挖掘强启动子。
一种基于深度学习大肠杆菌启动子识别强弱分类方法

[发明专利]一种合成赤霉素3的重组酿酒酵母菌株及其应用-CN202310606617.7在审
发明人：周景文;李珊;曾伟主;陈坚;高倩 -专利权人：江南大学
申请日： 2023-05-26 - 公布日： 2023-08-25 - 主分类号： C12N1/19 文献下载
摘要：本发明公开了一种合成赤霉素3的重组酿酒酵母菌株及其应用，属于基因工程与生物工程技术领域。本发明将关键基因KS整合于基因组位点表达，并将来源于藤仓赤霉菌的双功能二磷酸合成酶GfKS、GA碳13氧化酶GfC13ox、GA去饱和酶GfDES，来源于拟南芥的贝壳杉烷氧化酶AtKO、贝壳杉烯酸氧化酶AtKAO、GA碳3氧化酶AtC3ox和GA碳20氧化酶AtC20ox用于赤霉素3合成途径的构建，进一步通过启动子的筛选、引入电子传递系统，并融合AtKO和AtKAO进一步提高了重组酿酒酵母的赤霉素3产量，使发酵120h的产量达424.1mg/L，是目前赤霉素3在酿酒酵母中的最高产量。
一种合成赤霉素重组酿酒酵母菌株及其应用

[发明专利]一种合成赤霉素7的重组酿酒酵母菌株及其应用-CN202310607231.8在审
发明人：周景文;李珊;曾伟主;陈坚;高倩 -专利权人：江南大学
申请日： 2023-05-26 - 公布日： 2023-08-25 - 主分类号： C12N1/19 文献下载
摘要：本发明公开了一种合成赤霉素7的重组酿酒酵母菌株及其应用，属于基因工程与生物工程技术领域。本发明将关键基因KS整合于基因组位点表达，并将来源于藤仓赤霉菌的双功能二磷酸合成酶GfKS、GA去饱和酶GfDES，来源于拟南芥的贝壳杉烷氧化酶AtKO、贝壳杉烯酸氧化酶AtKAO、GA碳3氧化酶AtC3ox和GA碳20氧化酶AtC20ox用于赤霉素7合成途径的构建，获得了能够生产赤霉素7的重组酿酒酵母。并通过启动子的筛选，引入电子传递系统，以及融合AtKO和AtKAO进一步提高了重组酿酒酵母的赤霉素7产量，使发酵120h的产量达204.4mg/L，为工业化生产赤霉素7奠定了基础。
一种合成赤霉素重组酿酒酵母菌株及其应用

[发明专利]大肠杆菌的高密度培养及在催化生产槲皮素中的应用-CN202210129181.2有效
发明人：周景文;单小玉;余世琴;徐沙;曾伟主;陈坚 -专利权人：江南大学
申请日： 2022-02-11 - 公布日： 2023-08-25 - 主分类号： C12N1/21 文献下载
摘要：本发明公开了大肠杆菌的高密度培养及在催化生产槲皮素中的应用，属于发酵工程及生物医药技术领域。本发明通过优化发酵培养基，使构建的重组菌株获得较高浓度的菌体密度，且具有较好的全细胞催化活性。将高密度发酵获得的重组大肠杆菌作为催化剂进行全细胞催化，可在4‑6h内催化40g/L的底物芦丁完全水解生成槲皮素。
大肠杆菌高密度培养催化生产槲皮素中的应用

[发明专利]一种提高酿酒酵母中花青素合成效率的方法-CN202111135897.5有效
发明人：周景文;徐沙;李广健;曾伟主;余世琴;陈坚 -专利权人：江南大学
申请日： 2021-09-27 - 公布日： 2023-08-25 - 主分类号： C12N15/81 文献下载
摘要：本发明公开了一种提高酿酒酵母中花青素合成效率的方法，属于生物工程技术领域。本发明构建了含花青素合成途径基因的重组质粒，将其转化至酿酒酵母宿主细胞中，使酿酒酵母具备了合成花青素的能力，并引入了苹果来源的花青素转运相关蛋白，提高了花青素的转化率，进一步敲出了酿酒酵母内源花青素降解酶EXG1，提高了花青素在发酵体系中的稳定性。本发明的酿酒酵母可利用2.0g/L的二氢槲皮素作为底物，生产获得254.5mg·L‑1矢车菊色素‑3‑O‑葡萄糖苷，与原始对照相比花青素产量提高了141倍，与现有方法相比更具有工业化生产潜力。
一种提高酿酒酵母花青素合成效率方法

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