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[发明专利]实现植物基因组外源序列定点整合的方法-CN201610602370.1在审
发明人：宋书锋;李新奇;李莉;张大兵;符习勤;袁定阳;袁隆平 -专利权人：湖南杂交水稻研究中心
申请日： 2016-07-27 - 公布日： 2016-12-21 - 主分类号： C12N15/82 文献下载
摘要：本发明公开了一种实现植物基因组外源基因定点整合的方法，包括如下步骤：步骤一、构建能够在植株基因组的目的整合位点区域进行基因组编辑的打靶载体，该打靶载体包括整合靶位点序列和Cas9核酸酶表达元件；步骤二、构建外源基因转化载体，并将该外源基因转化载体随机整合到植株的基因组中，得到转化有该外源基因的转基因株系，其中，外源基因转化载体包含整合位点序列和与目的整合位点两翼相同的同源臂序列，且该同源臂序列位于整合位点序列和外源基因之间；步骤三、将打靶载体转化入转基因株系内，筛选得到只含有定点整合到目的整合位点区域的株系。本发明能够提高植物定点整合外源基因的成功率。
实现植物基因组序列定点整合方法

[发明专利]促进外源蛋白在CHO细胞中高效表达的核苷酸序列片段-CN200910213985.5无效
发明人：陈小佳;洪岸 -专利权人：暨南大学
申请日： 2009-12-18 - 公布日： 2010-09-22 - 主分类号： C12N15/113 文献下载
摘要：促进外源蛋白在CHO细胞中高效表达的核苷酸序列片段，其核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示。本发明将KH序列克隆到不同的表达载体的转录本两侧或者一侧，然后再克隆如相应的外源基因，将采用表达不同外源基因的表达载体分别转染CHO-K1，CHO/dhfr-，DG44等细胞，经检查相应的单克隆细胞形成率、单克隆细胞传代稳定性、外源基因表达水平等，数据显示加了KH序列的载体能够提高外源基因的表达水平以及提高外源基因的传代稳定性。
促进蛋白 cho 细胞高效表达核苷酸序列片段

[发明专利]禽源启动子表达载体及其构建方法与应用-CN200910076382.5无效
发明人：刘金华;马婧姣;刘芹防;蒲娟;毕玉海;傅光华 -专利权人：中国农业大学
申请日： 2009-01-14 - 公布日： 2009-07-15 - 主分类号： C12N15/63 文献下载
摘要：本发明公开了一种禽源启动子表达载体及其构建方法与应用。该禽源启动子表达载体是一种环状载体，包含原核复制起点、一个真核复制起点、筛选标记基因和外源基因表达盒；所述外源基因表达盒自上游至下游依次含有LTR启动子、连接片段和多聚腺苷酸加尾信号；所述LTR启动子的核苷酸序列为序列表中序列1自5′末端第1-607位；所述连接片段含有EcoRV识别序列。使用本发明的pAPP-Vector构建表达外源基因的重组载体的过程简便、快速、经济、高效，可以快速完成大量外源基因的表达载体的构建。将在转基因动物研究中发挥重要作用。
启动子表达载体及其构建方法应用

[发明专利]转基因玉米MON88017转化事件外源插入载体旁侧基因及其应用-CN201110058482.2无效
发明人：路兴波;袁磊;孙红炜;武海斌;李凡;韩伟 -专利权人：山东省农业科学院植物保护研究所
申请日： 2011-03-11 - 公布日： 2011-10-05 - 主分类号： C12N15/11 文献下载
摘要：本发明公开了转基因玉米MON88017转化事件外源插入载体旁侧基因，其序列如序列表中1所示。本发明的转基因玉米MON88017转化事件外源插入载体旁侧基因可以用于特异性定性检测转基因玉米及相关产品是否含有MON88017转化事件以及其含量，该检测方法灵敏，准确，简单，可靠，具有广阔的市场前景。本发明首次分析并确认了转基因玉米Mon88017转化事件外源插入载体旁侧序列中不同碱基的来源，并确定外源插入载体序列和玉米基因组序列的接合位点，为科学研究做出了贡献。
转基因玉米 mon88017 转化事件插入载体旁侧基因及其应用

[发明专利]介导外源基因在哺乳动物细胞高效表达的载体及其应用-CN201110164439.4有效
发明人：李世崇;陈昭烈;叶玲玲;刘红;刘兴茂;何文俊;王启伟 -专利权人：中国人民解放军军事医学科学院生物工程研究所
申请日： 2011-06-17 - 公布日： 2011-11-23 - 主分类号： C12N15/85 文献下载
摘要：本发明公开了介导外源基因在哺乳动物细胞高效表达的组合载体，该组合载体包括外源基因高效表达载体pATEW和人工转录因子表达载体pcDNA3.1(+)/Hy/GVP4。外源基因高效表达载体pATEW组合了人β-globin MAR序列、hEF-1α基因转录调控序列、转录后调控元件WPRE等基因表达调控元件和人工转录因子结合位点序列；人工转录因子表达载体pcDNA3.1(+)/Hy/GVP4表达由VP16中12肽(DALDDFDLDMLG)的4个串联重复作为人工转录因子的功能结构域和SV40的核定位序列两部分连接而成的人工转录因子GVP4。将携带外源基因的pATEW和pcDNA3.1(+)/Hy/GVP4共转染哺乳动物细胞，即可实现外源基因在哺乳动物细胞中的高效表达。
介导外源基因哺乳动物细胞高效表达载体及其应用

[发明专利]外源基因定点整合至ACTB基因下游的打靶载体构建方法及其应用-CN201910658641.9在审
发明人：阮进学;熊友才;赵书红;韩晓松;庄荣志;赵长志;余梅;李新云;李长春;谢胜松;付亮亮;赵云霞 -专利权人：华中农业大学
申请日： 2019-07-19 - 公布日： 2019-10-22 - 主分类号： C12N15/85 文献下载
摘要：本发明公开了一种将外源基因定点整合至ACTB（beta‑actin）基因下游的打靶载体，所述的打靶载体是以ACTB基因终止密码子上下游的部分序列为左、右同源臂，将左同源臂、2A剪切肽序列、外源基因序列和右同源臂依次连接起来并构建到真核表达载体或克隆载体骨架上将该打靶载体与含特异性靶向猪ACTB基因下游的CRISPR/Cas9切割载体共转染至猪真核细胞中，实验及测序检测证实该外源基因定点整合至ACTB基因下游。本发明提供的这一打靶位点，可以拓宽外源基因在猪基因组中整合位点的范围，为制备外源基因高效稳定表达的转基因猪奠定基础。
外源基因打靶载体定点整合同源臂位点打靶载体构建高效稳定表达外源基因序列真核表达载体特异性靶向终止密码子测序检测克隆载体依次连接真核细胞猪基因组转基因猪剪切共转染肽序列构建整合制备切割基因应用

[发明专利]转基因鉴定方法及鉴定装置-CN201910741623.7有效
发明人：王克剑;刘庆;王春;焦晓真 -专利权人：中国水稻研究所
申请日： 2019-08-12 - 公布日： 2021-12-10 - 主分类号： G16B30/10 文献下载
摘要：该鉴定方法包括：获取待鉴定样本的待测数据、待鉴定样本的载体序列和宿主基因组序列；将所述宿主基因组序列与所述待鉴定样本的载体序列进行同源性比对，并在所述待鉴定样本的载体序列上标记与所述宿主基因组序列同源的区域，得到标记区域；将所述待测数据与所述待鉴定样本的载体序列进行比对，得到多个候选外源DNA片段；从多个所述候选外源DNA片段中去除含有所述标记区域的片段，得到外源DNA片段。通过对待鉴定样本的载体序列上的同源性区域进行标记，以便从比对得到的多个候选外源DNA片段中去除标记的区域，从而排除假阳性错误，因此该鉴定方法操作简单且准确性高。
转基因鉴定方法装置

[发明专利]动物乳腺组织特异性高效表达载体-CN97116676.5无效
发明人：陈永福;陈东;安晓荣 -专利权人：中国农业大学
申请日： 1997-08-15 - 公布日： 2000-11-29 - 主分类号： C12N15/85 文献下载
摘要：本发明公开了使外源基因在动物乳腺组织中特异表达的载体ｐＢＣＤ，该载体含有控制外源基因在乳腺组织特异表达的羊ＢＬＧ基因及其表达控制序列，驱动外源基因高效合成蛋白质的小鼠ＳＴＡＴ序列，以及便于将外源基因插入载体的位于羊本发明还公开了利用该载体在动物乳腺组织中表达外源基因（如人生长激素）的方法。
动物乳腺组织特异性高效表达载体

[发明专利]确定转基因生物中外源DNA片段的序列、插入位置和边际序列的方法-CN201610569874.8有效
发明人：蒋炳军;孙石;韩天富;吴存祥;侯文胜;陈莉;武婷婷 -专利权人：中国农业科学院作物科学研究所
申请日： 2016-07-19 - 公布日： 2020-07-28 - 主分类号： C12Q1/6869 文献下载
摘要：本发明公开了确定转基因生物中外源DNA片段的序列、插入位置和边际序列的方法。本发明公开的方法包括：对转基因生物的全基因组进行测序，将序列A与转基因生物全基因组序列进行序列比对，确定转基因生物中外源DNA片段的序列、插入位置和边际序列；转基因生物为利用含有外源DNA片段的载体处理受体生物得到的转基因生物；序列A为a1)、a2)或a3)：a1)载体的全长序列；a2)来自载体的含有外源DNA片段的任一DNA片段的序列；a3外源DNA片段或其中任一片段的序列。本发明的方法可以突破物种限制，不受构建转基因生物时所用的目的基因的限制，可以更加快速精准地检测转基因插入位置、边际序列甚至拷贝数。
确定转基因生物中外 dna 片段序列插入位置边际方法

[发明专利]外源基因定点整合至GAPDH基因下游的打靶载体构建方法及其应用-CN201910559340.0在审
发明人：阮进学;韩晓松;赵书红;熊友才;庄荣志;赵长志;余梅;李新云;李长春;谢胜松;付亮亮;赵云霞 -专利权人：华中农业大学
申请日： 2019-06-25 - 公布日： 2019-10-08 - 主分类号： C12N15/85 文献下载
摘要：本发明公开了一种将外源基因定点整合至猪GAPDH基因下游的打靶载体，所述打靶载体是以GAPDH基因终止密码子上下游序列作为左、右同源臂，将左同源臂、2A序列、外源基因序列和右同源臂依次连接起来，反向插入到真核表达载体的多克隆位点上将该打靶载体与含特异性靶向猪GAPDH基因下游的sgRNA的CRISPR/Cas9切割载体共转染猪真核细胞中，可以将外源基因定点整合至GAPDH基因下游。本发明提供的这一打靶位点，可以拓宽外源基因在猪基因组中整合位点的范围，为制备外源基因在猪基因组中高效稳定的表达奠定基础。
外源基因打靶载体定点整合同源臂猪基因组位点打靶载体构建外源基因序列真核表达载体多克隆位点特异性靶向终止密码子依次连接真核细胞共转染整合制备切割应用

[发明专利]一种质粒载体及展示外源蛋白的MS2噬菌体类似颗粒的制备方法-CN202210876094.3在审
发明人：周于婷;欧阳永长 -专利权人：广州医科大学
申请日： 2022-07-25 - 公布日： 2023-07-04 - 主分类号： C12N15/70 文献下载
摘要：本发明涉及生物医药技术领域，具体为一种质粒载体及展示外源蛋白的MS2噬菌体类似颗粒的制备方法。本发明提供的质粒载体的特征在于：该质粒载体依次含有阿拉伯糖启动子，MS2CP基因、琥珀密码子、Linker序列、外源蛋白基因插入部分、His标签编码序列、MS2噬菌体包装序列、锤头酶序列和编码MS2噬菌体成熟蛋白序列通过该质粒载体可以制备表面展示外源蛋白的MS2噬菌体类似颗粒，可应用于MS2噬菌体亚单位疫苗的制备。
一种质粒载体展示蛋白 ms2 噬菌体类似颗粒制备方法

[发明专利]转基因油菜T45事件外源插入载体左边界旁侧序列及其应用-CN200710051358.7无效
发明人：卢长明;吴刚;武玉花;肖玲 -专利权人：中国农业科学院油料作物研究所
申请日： 2007-01-24 - 公布日： 2007-08-22 - 主分类号： C12N15/82 文献下载
摘要：本发明公开了一种转基因油菜T45事件外源插入载体左边界旁侧序列及其应用。本发明以转基因油菜品种T45为材料，获得T45事件外源插入载体左边界旁侧序列，序列为SEQ NO.1。其中第1－255位碱基与插入载体序列相同，第256－2154位碱基与插入载体无同源性，为油菜基因组序列。本发明建立了转基因油菜外源基因整合事件T45的事件特异性定性、定量检测方法，可以进一步用于建立转基因油菜T45的其他事件特异性PCR检测方法研究。
转基因油菜 t45 事件插入载体边界旁侧序列及其应用

[发明专利]一种杆状病毒载体及其在昆虫细胞中制备rAAV的应用-CN202210528997.2有效
发明人：请求不公布姓名 -专利权人：睿征医药科技（武汉）有限公司
申请日： 2022-05-16 - 公布日： 2023-06-27 - 主分类号： C12N15/866 文献下载
摘要：本发明属于基因工程技术领域，具体公开了一种杆状病毒载体及其在昆虫细胞中制备rAAV的应用，该杆状病毒载体包含外源基因表达盒与稳定序列，所述稳定序列位于距离所述外源基因表达盒的5kb以内，所述稳定序列为CNE序列或NAE序列。本发明将CNE(或NAE)序列构建至重组杆状病毒载体上的外源基因表达盒附近，使得携带产生AAV所必需的功能蛋白表达盒或ITR核心表达元件等外源基因表达盒的重组杆状病毒感染昆虫细胞，在连续传代多代后，重组杆状病毒和
一种杆状病毒载体及其昆虫细胞制备 raav 应用

[发明专利]对外源基因进行正确分泌表达的多拷贝酵母表达载体-CN02117906.9有效
发明人：陈薇;齐连权;于长明;付玲;来大志 -专利权人：中国人民解放军军事医学科学院微生物流行病研究所
申请日： 2002-05-20 - 公布日： 2003-12-03 - 主分类号： C12N15/81 文献下载
摘要：本发明涉及一种酵母表达载体及其构建引物。本发明的目的是提供一种能够使外源基因在酵母中正确分泌表达的多拷贝酵母表达载体，它的DNA序列为序列表中序列1的核苷酸序列。本发明的第二个目的是提供二对构建上述表达载体的专用引物，它们是序列表中序列2、序列3和序列4、序列5的核苷酸序列。利用本发明的载体，将外源基因导入酵母中进行分泌表达，N端测序结果显示分泌表达的蛋白与天然蛋白结构一致。
对外基因进行正确分泌表达拷贝酵母载体

[发明专利]转基因高油酸油菜W-4事件外源插入左边界旁侧序列及应用-CN201010513697.4无效
发明人：陈松;戚存扣;张洁夫;浦惠明;高建芹;胡茂龙;龙卫华;陈新军;付三雄;陈锋;顾彗;周晓婴 -专利权人：江苏省农业科学院
申请日： 2010-10-20 - 公布日： 2011-02-09 - 主分类号： C12N15/11 文献下载
摘要：本发明公开一种转基因高油酸油菜W-4事件外源插入载体左边界旁测序列及其应用，涉及农业生物技术领域中转基因油菜的检测。本发明以甘蓝型转基因高油酸油菜W-4为材料，获得W-4事件外源插入载体左边界旁侧序列，见序列1。其中第1-365碱基为油菜基因组序列，第366-890碱基为载体序列。本发明依据旁侧序列设计特异性引物，建立了甘蓝型转基因高油酸油菜外源基因整合事件W-4的事件特异性定性PCR检测方法。
转基因油酸油菜事件插入边界旁侧序列应用

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