本发明公开了一种普鲁兰酶突变体、工程菌及其应用，所述普鲁兰酶突变体是将SEQ ID NO.1所示氨基酸序列的第365位、第401位、第504位或第499位氨基酸进行单突变或多突变获得的。本发明构建的普鲁兰酶突变体的催化活性、热稳定性与耐酸稳定性均得到了提高，其中突变体PulAR‑A365V‑401C‑H499A‑T504V的催化效率较野生型普鲁兰酶PulAR在pH5.0、6.0，60℃条件下分别提高了6.6倍与9.6倍；在60℃，65℃的半衰期分别比野生型普鲁兰酶提高了2.6和3.1倍，且在pH 4.5与pH 5.0的半衰期分别比野生型普鲁兰酶提高了1.6和1.8倍。
本发明公开了一种制备玉米抗性淀粉的III型普鲁兰水解酶突变体及其制备方法和应用，涉及生物酶工程和基因工程领域。所述III型普鲁兰水解酶突变体的氨基酸序列如SEQ ID NO.1所示。本发明对III型普鲁兰水解酶TK‑PUL中邻近催化活性中心的第500位异亮氨酸以及第538位亮氨酸进行饱和突变，构建得到了氨基酸序列如SEQ IDNO.1所示的III型普鲁兰水解酶突变体。本发明提供的突变型III型普鲁兰水解酶突变体对普通玉米淀粉的比活力由突变前的48.08U/mg提高到133.66U/mg，利用该III型普鲁兰水解酶突变体制备玉米抗性淀粉的制备得率由突变前的30.87％
本发明涉及基因工程领域，具体地，本发明涉及一种碱性耐盐普鲁兰酶PulA及其基因和应用。碱性耐盐普鲁兰酶PulA，其氨基酸序列如SEQ ID NO.1所示，以及编码上述普鲁兰酶的基因组编码基因PulA，其核苷酸序列如SEQ ID NO.2所示，以及包含该基因的重组载体和重组菌株。该普鲁兰酶PulA最适pH 9.0，在10.0的时候剩余77%的酶活。本发明的普鲁兰酶具有碱性耐盐的特点，可应用于洗涤剂、食品等工业领域。
