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[发明专利]一种能够表达金针菇免疫调节蛋白的重组菌株及其构建方法、蛋白表达纯化方法和蛋白应用-CN201210475139.2有效
发明人：孔祥辉;张介驰;张丕奇;戴肖东;韩增华;马庆芳;刘佳宁;党阿丽 -专利权人：黑龙江省科学院微生物研究所
申请日： 2012-11-21 - 公布日： 2013-02-13 - 主分类号： C12N1/21 文献下载
摘要：一种能够表达金针菇免疫调节蛋白的重组菌株及其构建方法、蛋白表达纯化方法和蛋白应用，它涉及一种重组菌株的构建、表达纯化及其应用。本发明要解决现有金针菇免疫调节蛋白工程菌株表达率低，表达产物多为不溶性的包涵体，结构不确定以及菌体破碎、纯化工艺复杂不适合大规模生产应用的问题。本发明将金针菇免疫调节蛋白基因，以Transetta(DE3)作为宿主菌，构建重组菌株；再用IPTG诱导表达，通过溶菌酶法结合超声法处理后采用Ni-His·Band柱层析，Sephadex G25凝胶层析柱方法脱盐
一种能够表达金针菇免疫调节蛋白重组菌株及其构建方法纯化应用

[发明专利]一种人活性颗粒酶K重组蛋白的制备方法-CN201310090856.8无效
发明人：江文正;龙凤英;杜佳妮;陈冉;孔晓波;史亚茹 -专利权人：华东师范大学
申请日： 2013-03-21 - 公布日： 2013-07-17 - 主分类号： C12N15/57 文献下载
摘要：本发明涉及一种人活性颗粒酶K重组蛋白（rhGzmK）的制备方法，该重组蛋白去除了人颗粒酶K（hGzmK）N端的24个氨基酸，并在C端增加了6个组氨酸，以方便用镍离子柱进行纯化。该重组蛋白以包涵体的形式表达，可利用镍亲和层析柱进行纯化，其纯度可达95%以上。该方法具有操作简单、产量高、重组蛋白易于纯化等特点，且纯化蛋白具有较高的生物学活性。
一种活性颗粒重组蛋白制备方法

[发明专利]包涵体洗涤机-CN201610526693.7在审
发明人：曹政;赵扬扬;李春燕;陈千林 -专利权人：重庆澳龙生物制品有限公司
申请日： 2016-07-06 - 公布日： 2018-01-16 - 主分类号： C07K1/34 文献下载
摘要：本发明公开了一种包涵体洗涤机，包括研磨机，所述研磨机上设有包涵体入口和清洗液入口Ⅰ，所述研磨机的出料口上连接设有混合罐Ⅰ，所述混合罐Ⅰ内设有搅拌器Ⅰ，且所述混合罐Ⅰ的出料口上连接设有中空纤维滤柱Ⅰ，所述中空纤维滤柱Ⅰ上设有滤液出口Ⅰ和包涵体出口Ⅰ，且所述混合罐Ⅰ的出料口和所述中空纤维滤柱Ⅰ的入料口之间设有蠕动泵Ⅰ。本发明的包涵体洗涤机，不仅能够满足包涵体的清洗要求，而且具有收率高、操作简单的优点。
包涵洗涤

[发明专利]一种人肿瘤坏死因子Ⅰ型受体胞外区蛋白的制备方法-CN201810371599.8有效
发明人：陆一鸣;李安;江晗;王瑞娜;欧阳松应;朱艳平 -专利权人：中国人民解放军第二军医大学
申请日： 2018-04-24 - 公布日： 2022-04-01 - 主分类号： C07K14/715 文献下载
摘要：本发明涉及生物医药工程技术领域，提供了一种人肿瘤坏死因子Ⅰ型受体胞外区蛋白的制备方法，该制备方法包括如下几个大步骤：1)构建人TNFR1‑ECD的原核表达载体，并将其转化入大肠杆菌DH5α菌株内；2)诱导人TNFR1‑ECD蛋白在大肠杆菌中表达；3)人TNFR1‑ECD蛋白包涵体洗涤和变性；4)人TNFR1‑ECD蛋白的复性；5)人TNFR1‑ECD蛋白纯化，使得本发明的人源TNFR1‑ECD蛋白能够在大肠杆菌细胞中表达，通过菌体破碎后沉淀蛋白的变性、复性，镍柱亲和层析以及阳离子交换层析纯化得到，具有纯度高、生物活性显著、生产成本低且制备步骤简便的特点，适合于生物医药产业大规模生产。
一种肿瘤坏死因子受体胞外区蛋白制备方法

[发明专利]重组创伤弧菌铁摄取调节蛋白及制备方法-CN200910219664.6无效
发明人：王秀利;袁野;葛辉;仇雪梅 -专利权人：大连水产学院
申请日： 2009-11-05 - 公布日： 2010-04-28 - 主分类号： C07K14/28 文献下载
摘要：本发明公开一种重组创伤弧菌铁摄取调节蛋白及制备方法，根据创伤弧菌铁摄取调节蛋白的DNA序列，设计引物对并以CTAB法提取的创伤弧菌DNA为模板进行PCR扩增，PCR产物与pMD19T载体连接得重组质粒，经双酶切后再与表达载体pET-32a(+)连接，获重组表达质粒并转化至大肠杆菌BL21(DE3)中；通过IPTG诱导实现了重组蛋白的可溶性表达。因在表达过程中不产生包涵体，该表达质粒表达的融合蛋白带有组氨酸标签，方便了样品的鉴定和纯化，避免了样品的变性和复性，不但操作简单，降低了制作成本，更主要的是蛋白结构不受破坏；重组蛋白纯度好、得率高且不易降解，适应于工业化生产，为进一步研究创伤弧菌铁摄取调节蛋白的功能奠定基础。
重组创伤弧菌摄取调节蛋白制备方法

[发明专利]一种含单跨膜区的膜蛋白其跨膜区的纯化方法-CN202011104152.8在审
发明人：李清心;吴金川;陈骏佳;蚁细苗;康佩姿;班雯婷 -专利权人：广东省科学院生物工程研究所
申请日： 2020-10-15 - 公布日： 2021-01-12 - 主分类号： C07K19/00 文献下载
摘要：本发明公开了一种含单跨膜区的膜蛋白其跨膜区的纯化方。它是在含单跨膜区的膜蛋白的N或C端加入多聚组氨酸标签，然后将此含组氨酸标签的含单跨膜区的膜蛋白的编码基因转入到表达质粒中，再将表达质粒转入表达菌中，培养表达菌并诱导含单跨膜区的膜蛋白的表达，将表达菌破碎，并用含尿素和变性剂的缓冲液将含单跨膜区的膜蛋白溶解，在有尿素的情况下利用组氨酸标签对单跨膜区的膜蛋白进行纯化，并同时用再折叠剂使单跨膜区的膜蛋白再折叠并去除尿素，获得折叠的单跨膜区的膜蛋白。采用直接加入尿素法溶解目标蛋白，不需要收集细胞包涵体，既节约时间，也提高目标蛋白的产量。
一种含单跨膜区膜蛋白跨膜区纯化方法

[发明专利]一种人乳头瘤病毒HPV16型E7活性蛋白的制备方法及应用-CN202110957482.X在审
发明人：于倩;易汪雪;蔡赢;徐娅;王营;柯红;殷婷子;张振 -专利权人：武汉华美生物工程有限公司
申请日： 2021-08-18 - 公布日： 2021-11-12 - 主分类号： C12N15/37 文献下载
摘要：本发明公开了一种人乳头瘤病毒HPV16型E7活性蛋白的制备方法及应用，通过对HPV16型E7蛋白的已知编码基因进行密码子优化，得到了如SEQ ID NO.1所示的HPV16型E7蛋白编码基因，并利用大肠杆菌发酵系统进行体外表达，从而显著提高了目的蛋白的溶解性，使其表现为可溶性蛋白，避免目的蛋白以包涵体形式进行表达且需要重新变性溶解复性才可得到活性蛋白，从而显著提高了E7蛋白的制备效率，可高效获得具有高纯度、天然活性的HPV16型E7蛋白。该方法操作简单，成本低廉，采用该方法制备得到的HPV16型E7活性蛋白可作为抗原，用于制备抗HPV的治疗性疫苗，具有极高的生产应用价值。
一种乳头病毒 hpv16 e7 活性蛋白制备方法应用

[发明专利]一种基于无标签p35蛋白非洲猪瘟病毒ELISA检测方法-CN202310342054.5在审
发明人：吴植;朱善元;卢会鹏;王安平;谢军;曹世诺;徐艳 -专利权人：江苏农牧科技职业学院
申请日： 2023-04-03 - 公布日： 2023-07-18 - 主分类号： G01N33/68 文献下载
摘要：本发明提供一种基于无标签p35蛋白非洲猪瘟病毒ELISA检测方法，涉及非洲猪瘟病毒ELISA检测技术领域。该基于无标签p35蛋白非洲猪瘟病毒ELISA检测方法，包括以下具体步骤：S1、首先以ASFV p35抗原作为目的基因，与类弹性蛋白多肽融合表达，然后使用相变循环纯化ELP‑p35融合蛋白；S2、使用烟草蚀纹病毒蛋白酶活性包涵体切除ELP标签，再用相变循环回收纯化得到无标签p35蛋白；S3、以纯化无标签p35蛋白为包被抗原，建立了ASFV间接ELISA抗体检测方法。本发明，通过选用的无标签p35蛋白作为包被抗原，减少了非特异性结题，达到精准检测的效果，通过相变性质，分离出了较纯的蛋白质，相较亲和层析等蛋白纯化相比，纯化过程简单，经济实惠。
一种基于标签 p35 蛋白非洲猪瘟病毒 elisa 检测方法

[发明专利]一种无脂代餐粉及其生产工艺-CN201810680953.5在审
发明人：牛祥臣;时玉强;刘军;李顺秀;马军;王彩华 -专利权人：山东禹王生态食业有限公司
申请日： 2018-06-27 - 公布日： 2018-11-13 - 主分类号： A23L33/10 文献下载
摘要：本发明公开了一种无脂代餐粉及其生产工艺，包括如下步骤：(1)大豆膳食纤维的生产；(2)大豆分离蛋白的准备；(3)红枣粉制备；(4)胡萝卜粉制备；(5)大豆乳清合生元制备；(6)产品配方；(7)配方混合工艺本发明充分利用大豆分离蛋白生产过程中的副产品，有效的降低了大豆蛋白行业的固废和液费，充分利用了大豆的生物资源，能够减少资源浪费。可以提供包涵大豆蛋白，膳食纤维，大豆低聚糖以及乳酸链球菌等益生菌组分，并且达到无脂标准，使用低能量甜味剂，富含益生元，能够提高机体免疫力，同时达到减肥的效果。
制备大豆蛋白生产工艺大豆分离蛋白生产大豆分离蛋白大豆膳食纤维低能量甜味剂大豆低聚糖机体免疫力乳酸链球菌产品配方大豆乳清胡萝卜粉混合工艺膳食纤维合生元红枣粉益生菌益生元生物资源富含减肥配方大豆生产

[发明专利]基于标签MBP蛋白高产磷脂酶B的重组大肠杆菌及其构建与培养方法-CN202010014005.5在审
发明人：陈可泉;王昕;许晟 -专利权人：南京凯诺生物科技有限公司
申请日： 2020-01-07 - 公布日： 2020-05-01 - 主分类号： C12N1/21 文献下载
摘要：本发明公开了基于标签MBP蛋白高产磷脂酶B的重组大肠杆菌及其构建与培养方法。Pseudomonas fluorescens 的磷脂酶B基因PLB，经密码子优化后，重组菌经破碎后得到的粗酶液中目标蛋白多以包涵体形式存在，通过添加标签MBP蛋白融合表达明显的提高了PLB蛋白的可溶性表达，与原始菌株相比，酶活提高了约4倍。
基于标签 mbp 蛋白高产磷脂酶重组大肠杆菌及其构建培养方法

[发明专利]埃可病毒30型衣壳蛋白(VP)的制备方法-CN200610051959.3有效
发明人：周林福;陈峰;朱海红;陈智 -专利权人：浙江大学
申请日： 2006-06-14 - 公布日： 2006-12-06 - 主分类号： C07K14/085 文献下载
摘要：埃可病毒30型衣壳蛋白(VP)的制备方法，采用经细胞培养的埃可病毒30型，经trizol裂解、抽提得到VPmRNA，逆转录得到VP的cDNA，用PCR技术扩增、纯化、酶切获得重组质粒Pet41a+VP；并转化至大肠杆菌DH5a，经培养扩增，抽提纯化，获测序正确的重组质粒；将测序正确的重组质粒转化至BL21(DE3)菌，在30℃，0.1mM IPTG条件下表达重组蛋白；将表达重组蛋白的活化菌株培养，高密度发酵，低溶氧条件下诱导，所获菌体裂解，洗出并溶解包涵体，纯化。通过免疫测定或生物活性测定检测并收集获纯化的埃可病毒30型衣壳蛋白。
病毒 30 型衣壳蛋白 vp 制备方法

[发明专利]一种高效表达D-阿洛酮糖3-差向异构酶的工程菌及应用-CN202210768159.2有效
发明人：潘月;刘超;魏万涛;冷雪颖;裴亮;刘行波;王锦 -专利权人：四川盈嘉合生科技有限公司
申请日： 2022-07-01 - 公布日： 2023-09-01 - 主分类号： C12N15/70 文献下载
摘要：本发明构建了高效表达D‑阿洛酮糖3‑差向异构酶的工程菌，该工程菌中包含构建的重组表达载体和共表达载体，所述重组表达载体包含表达D‑阿洛酮糖3‑差向异构酶的基因和组成型启动子HCE基因，所述共表达载体包含分子伴侣蛋白的基因，所述分子伴侣蛋白包括dnaJ、dnaK、GroEL和grpE。本发明通过替换启动子更高效的进行表达，并使D‑阿洛酮糖3‑差向异构酶与分子伴侣共表达，有效减少包涵体蛋白的形成，分子伴侣进行辅助折叠形成四聚体高级结构，提高表达出可溶蛋白的效率，从而提高D‑阿洛酮糖3‑
一种高效表达阿洛酮糖差向异构工程应用

[发明专利]可溶性猪水疱病VP1抗原的制备方法-CN200810067372.0无效
发明人：刘湘涛;尹双辉;尚佑军;田宏;孙世琪 -专利权人：中国农业科学院兰州兽医研究所
申请日： 2008-05-23 - 公布日： 2008-10-15 - 主分类号： C12N15/41 文献下载
摘要：一种制备可溶性猪水疱病VP1抗原的方法，所述方法包括以下步骤：(1)克隆VP1基因；(2)构建rVP1；(3)诱导rVP1表达产生可溶性VP1蛋白；和(4)纯化可溶性VP1蛋白；其中诱导剂为IPTG，其最终浓度为所述方法在大肠杆菌中表达产生了可溶性VP1蛋白，减少了包涵体的形成，避免复杂的变性和复性过程。纯化所得VP1蛋白纯度高，免疫学特性与SVDV粒子相似，可替代SVDV粒子作为检测用抗原建立敏感、特异、安全和可靠的SVDV血清抗体的间接ELISA检测方法。
可溶性水疱 vp1 抗原制备方法

[发明专利]高比活HuG－CSF酵母表达载体、高产菌株及HuG－CSF生产方法-CN200510129889.4无效
发明人：梁国栋;陈海宁;邓刚;蒲广西;郝新保;白玉杰 -专利权人：海南国栋药物研究所有限公司
申请日： 2005-12-09 - 公布日： 2006-08-30 - 主分类号： C12N15/81 文献下载
摘要：本发明采用酵母分泌表达系统取代大肠杆菌包涵体表达系统，发酵液上清中的HuG－CSF蛋白含量占总分泌蛋白的80％以上，目标蛋白HuG－CSF不需要复性，其生物比活性可达到8.0×10⁸单位/毫克蛋白，毒副作用低；分离纯化过程中只需要将离心后的上清液直接过离子交换柱和疏水柱即可达到98％以上的纯度，大大简化了生产工序，降低了生产成本，在工业生产中应用将有良好的经济效益。
hug csf 酵母表达载体高产菌株生产方法

[发明专利]拟肽化合物在制备抑制沙眼衣原体细胞内生长药物中的用途-CN201811613557.7有效
发明人：王勇;王芙艳;蔡继峰;周亚春;陆小芳 -专利权人：中南大学
申请日： 2018-12-27 - 公布日： 2020-09-01 - 主分类号： A61K38/07 文献下载
摘要：本发明提供一种拟肽化合物在制备抑制沙眼衣原体细胞内生长药物中的用途，所述拟肽化合物能够直接作用于沙眼衣原体HtrA蛋白，并能在10μM水平显著抑制沙眼衣原体在细胞内的发育，减小了沙眼衣原体包涵体的数量与面积
化合物制备抑制沙眼衣原体细胞内生长药物中的用途