本发明涉及一类酶活显著提高的持续性内切葡聚糖酶突变体及其应用。本发明所述突变体包含氨基酸序列的第51位和/或第93位氨基酸突变,所述内切纤维素酶的氨基酸序列如SEQ ID NO:1。本发明采用迭代饱和突变技术,基于进化耦合分析,通过选择具有高耦合强度的氨基酸残基对作为关键突变位点优化持续性内切葡聚糖酶的分子结构、提高酶活。与野生型酶相比,本发明所述持续性内切葡聚糖酶突变体的外切酶和内切酶活性显著增强,对纤维素底物的高效降解和降低生成成本具有重要的意义。
本发明提出了一种源自宇佐美曲霉(Aspergillus usamii)E001菌株的新型β-1,4-内切葡聚糖酶基因完整mRNA和DNA序列的克隆和分析方法,其核苷酸序列分别为SEQ ID NO:1和SEQ生物信息学分析表明该β-1,4-内切葡聚糖酶属于糖苷水解酶第5家族,所以命名为Aus Cel5A,其氨基酸序列为SEQ ID NO:3,相应的基因命名为Aus cel5A。这为该基因的异源表达和工业化生产奠定了理论基础,有较大的工业化生产和应用潜力及经济价值,也为其它β-1,4-内切葡聚糖酶的研究奠定了理论基础。
本发明涉及农业生物技术领域,具体涉及内切葡聚糖酶NfEG12A突变体及其编码基因和应用。所述突变体为氨基酸序列如SEQ ID No.1所示的内切葡聚糖酶NfEG12A的第7位和/或第111位的氨基酸Y突变为W。本发明的突变体的最适温度与最适pH均与野生酶一致,为65℃和pH 5.0,这些突变体对β‑1,3‑1,4‑葡聚糖和木葡聚糖的催化效率分别提高了0.5‑0.8倍,且具有良好的耐热性和pH耐受性,因此在工业中有非常可观的应用前景
本发明提出了一种源自宇佐美曲霉(Aspergillus usamii)E001的β-1,4-内切葡聚糖酶基因完整mRNA和DNA序列的克隆方法,其核苷酸序列分别为SEQ ID NO:1和SEQ ID NO生物信息学分析表明该β-内切葡聚糖酶属于糖苷水解酶第12家族,命名为Aus Cel12A,其氨基酸序列为SEQ ID NO:3,相应的基因命名为Aus cel12A。制备的重组Aus Cel12A的最适作用温度和pH分别为60℃和5.0,在pH 4.0-7.0、60℃以下稳定,具有较大的工业化生产潜力和经济价值,也为其它β-内切葡聚糖酶的研究奠定了理论基础。