本发明公开了一种卤醇脱卤酶基因突变体及其应用。一种卤醇脱卤酶基因突变体,其核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示,其编码的卤醇脱卤酶氨基酸序列如SEQ ID NO.2所示。一种卤醇脱卤酶的制备方法,包括培养本发明所述的含有卤醇脱卤酶基因突变体的基因工程菌,获得重组表达的卤醇脱卤酶。利用本发明所述的卤醇脱卤酶基因突变体构建基因工程菌,并表达制备卤醇脱卤酶,以所述的卤醇脱卤酶为催化剂催化邻卤醇化合物脱卤素反应。将制得的卤醇脱卤酶应用于(R)-4-氰基-3-羟基丁酸乙酯的生产,在相同的生产条件下,产品的产率也有较大提高,达到93.6%;且卤醇脱卤酶用量较少,仅为20.2kg,极大的降低了生产成本。
本发明提供一种脱卤素酶基因LinB、脱卤素酶、脱卤素酶基因工程菌及其构建方法和应用方法。其中,脱卤素酶基因LinB包括(a)SEQ ID NO.1所示的核苷酸序列;(b)编码SEQ ID NO.2所示氨基酸序列的核苷酸序列;或(c),(a)或(b)的变异体。脱卤素酶包括SEQ ID NO.1所示的核苷酸序列编码的多肽;SEQ ID NO.2所示的氨基酸序列;或其变异体。脱卤素酶基因工程菌的构建方法包括将脱卤素酶基因LinB克隆入重组表达载体,导入宿主细胞,获得能够表达脱卤素酶的脱卤素酶基因工程菌。