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[发明专利]一种人源BAV-TAA疾病多能干细胞模型的构建方法-CN202110696403.4有效
发明人：王永煜;张欢;金培峰 -专利权人：温州医科大学
申请日： 2021-06-23 - 公布日： 2022-11-22 - 主分类号： C12N15/85 文献下载
摘要：本发明公开了一种人源BAV‑TAA疾病多能干细胞模型的构建方法，属于细胞模型技术领域；该构建方法包括以下步骤：对离体的BAV/TAA患者来源的血管组织进行体外培养，获得原代细胞；通过电转方法将含有重编程因子的附加体质粒导入所述原代血管细胞进行重编程，得到特异性iPSC细胞株；对所述特异性iPSC细胞株进行定向分化，得到人源BAV‑TAA疾病血管细胞模型。通过将体外分离的患者原代血管细胞重编程成为诱导多能干细胞，然后通过扩增并将其定向诱导分化，从而源源不断获得所需的细胞模型，为该疾病的研究提供大量特定细胞类型。
一种 bav taa 疾病多能干细胞模型构建方法

[发明专利]人胚中脑神经干细胞的体外分离培养及分化方法-CN201110447902.6无效
发明人：陆华 -专利权人：陆华
申请日： 2011-12-27 - 公布日： 2012-05-09 - 主分类号： C12N5/0797 文献下载
摘要：本发明提出一种人胚中脑神经干细胞的体外分离培养及分化方法，从人胚中脑中分离培养并鉴定神经干细胞。其包括步骤原代中脑神经干细胞的分离培养、原代细胞的传代培养、细胞诱导分化、免疫细胞化学染色以及细胞计数。本发明利用无血清培养和单细胞克隆技术在人胚皮层中分离具有单细胞克隆能力的细胞，并进行培养、传代，贴壁分化观察，采用间接免疫荧光检测克隆细胞的神经巢蛋白(Nestin)抗原和分化后特异性成熟神经细胞抗原的表达
中脑神经干细胞体外分离培养分化方法

[发明专利]人胚皮层神经干细胞的原代细胞的分离培养方法-CN201110448000.4无效
发明人：陆华 -专利权人：陆华
申请日： 2011-12-27 - 公布日： 2012-07-04 - 主分类号： C12N5/0735 文献下载
摘要：本发明提出一种人胚皮层神经干细胞的原代细胞的分离培养方法，其其应用于人胚皮层神经干细胞的分离和培养过程，所述人胚皮层神经干细胞的分离和培养过程包括步骤：原代细胞的分离和培养；传代培养及单细胞克隆、传代；本发明采用无血清培养和单细胞克隆技术从从胚龄12周的新鲜人胚皮层中成功建立一株人胚神经干细胞，该细胞具有连续克隆能力，可传达培养，表达神经巢蛋白抗原。
皮层神经干细胞细胞分离培养方法

[发明专利]一种治疗老年痴呆症、帕金森病的神经干细胞注射液-CN200510123306.7有效
发明人：沈丽;李凌松 -专利权人：北京科宇联合干细胞生物技术有限公司
申请日： 2005-11-17 - 公布日： 2007-05-23 - 主分类号： A61K45/00 文献下载
摘要：本发明涉及一种源于人的视网膜色素上皮细胞、用于治疗帕金森病的神经干细胞注射液，所述神经干细胞注射液中至少包括3×10⁶个源于人hRPE的神经干细胞，其中所述的源于人hRPE的神经干细胞为人视网膜色素上皮细胞分离培养的神经干细胞，该神经干细胞的制备方法，包括如下步骤：1)细胞的分离和原代培养：分离源于人的视网膜色素上皮层的hRPE细胞，匀浆，制成单细胞悬液，对细胞进行原代培养；2)hRPE细胞培养及传代：将上述原代培养液消化、终止消化反应，反复吹打使其进一步分散形成细胞悬液，离心弃上清，加培养基，使其进一步分散形成细胞悬液后过细胞筛，细胞转移到培养瓶，传代至少至第5代，3)按照注射液的制备方法将上述源于人的hRPE神经干细胞加生理盐水定容
一种治疗老年痴呆症帕金森病神经干细胞注射液

[发明专利]一种人原代骨巨细胞瘤细胞株GCTB28-luc及其构建方法和应用-CN201811600363.3在审
发明人：周振华;肖建如;李焱;张薇薇;龚德军;匡牧宇;曹佳实;贾奇;胡硕;王旭东;陈素 -专利权人：中国人民解放军第二军医大学第二附属医院
申请日： 2018-12-26 - 公布日： 2019-05-14 - 主分类号： C12N5/09 文献下载
摘要：一种人原代骨巨细胞瘤细胞株GCTB28‑luc及其构建方法和应用，所述人原代骨巨细胞瘤细胞株GCTB28保藏于中国典型培养物保藏中心，地址：中国武汉市武汉大学，保藏号为CCTCC NO：C2018178本发明构建的细胞株GCTB28‑luc具有人原代骨巨细胞瘤肿瘤细胞的特性，符合建系标准，可在培养基中进行体外培养，且体外培养生长稳定、能连续传代，进而方便可用于建立骨巨细胞瘤发生机理模型，可作为骨巨细胞瘤发病机制及个体化治疗体外研究的细胞材料
巨细胞瘤细胞株代骨骨巨细胞瘤保藏构建体外培养应用中国典型培养物个体化治疗发病机制机理模型连续传代体外研究细胞材料肿瘤细胞培养基可用制备筛选生长

[发明专利]一种人正常肾小管原代细胞及其体外分离培养和应用-CN201910575619.8有效
发明人：刘红亚;章小平;谌科;王前进;王鲜;史健;吕庆洋;熊之勇 -专利权人：武汉赛尔朗灵科技有限公司
申请日： 2019-06-28 - 公布日： 2021-02-23 - 主分类号： C12N5/071 文献下载
摘要：本发明公开一种人正常肾小管原代细胞及其体外分离培养和应用，该细胞命名为人正常肾小管原代细胞XHRN‑01，保藏编号为CCTCC NO：C201970。其原代细胞分离培养方法为：体外获取临床术后切除肾癌旁组织，经病理学鉴定无癌细胞侵染，去除组织中血管及脂肪组织，组织样本经胶原酶/胰酶消化，过滤，低速离心获取细胞沉淀，红细胞裂解液裂解红细胞后，用COMR本发明的细胞可用于在人正常细胞的生理学研究、体外正常细胞药物毒性研究、肾脏及其相关疾病包括肾癌、慢性肾炎及感染性疾病的发病机理及治疗药物筛选研究中的应用。
一种正常肾小管细胞及其体外分离培养应用

[发明专利]一种可用于人原代细胞基因编辑的Cas9蛋白的制备方法-CN201910745370.0在审
发明人：龙飞;张亚莉;岳江嫚;弓蒙蒙;胡金芳;张丽琴 -专利权人：西安宇繁生物科技有限责任公司
申请日： 2019-08-13 - 公布日： 2021-02-23 - 主分类号： C12N9/22 文献下载
摘要：本发明公开了一种可用于人原代细胞基因编辑的Cas9蛋白的制备方法，尤其是涉及一种阴离子交换层析法纯化Cas9蛋白的方法，使用所述方法纯化得到的Cas9蛋白经体外切割试验证明具有体外活性，可特异切割DNA序列；同时经过改造的Cas9蛋白N端和C端带有核定位序列，经电转化进入人原代细胞后可对特定基因进行敲除，证明纯化的Cas9蛋白具有体内活性。
一种用于人原代细胞基因编辑 cas9 蛋白制备方法

[发明专利]骨肉瘤类器官培养液、培养试剂组合及培养方法-CN202311112920.8在审
发明人：肖荣荣;刘建闯;程曦;向康禄;周宇 -专利权人：北京大橡科技有限公司
申请日： 2023-08-31 - 公布日： 2023-10-03 - 主分类号： C12N5/09 文献下载
摘要：本申请涉及生物组织工程技术领域，公开一种骨肉瘤类器官培养液，包括原代培养液和传代培养液，原代培养液和传代培养液均包括条件培养基、基础培养基、复合抗生素和生长因子。根据骨肉瘤类器官的特性，在原代培养液中减去了辅助蛋白条件培养基和表皮生长因子，且提高了青霉素‑链霉素的浓度，从而更有利于在原代培养中抑制原代组织的污染风险并能够纯化出骨肉瘤肿瘤细胞；以及，优化的传代培养液能够维持骨肉瘤病理特征适用于人源骨肉瘤类器官的培养。本申请还公开一种培养试剂组合及培养方法。
骨肉器官培养液培养试剂组合方法

[发明专利]一种永生化人源神经干细胞系及其制备方法-CN201810804437.9在审
发明人：陈陆馗;张桂龙 -专利权人：东南大学
申请日： 2018-07-20 - 公布日： 2018-11-23 - 主分类号： C12N5/10 文献下载
摘要：本发明公开了一种永生化人源神经干细胞系及其制备方法，该方法包括如下步骤：(1)分离培养原代人海马来源神经干细胞；(2)构建含L‑myc基因的重组慢病毒载体；(3)对上述重组慢病毒进行包装生产及上清液收集；(4)选取合适浓度病毒上清液对干细胞进行转染筛选及构建永生化人源神经干细胞系。本发明永生化细胞系的制备方法是一种新的稳定且安全有效的永生化编码策略；制备的永生化人源神经干细胞系具有原代神经干细胞的所有生物学特征，同时也具有正常的三系分化特性，可以成功分化为神经元、星形胶质细胞及少突胶质细胞，同时该细胞系的生长速度及成神经球的能力较原代细胞强，成功传代20代以后依然可以快速增殖，并且无致瘤性。
永生化神经干细胞系人源制备神经干细胞构建神经元重组慢病毒载体少突胶质细胞星形胶质细胞传代上清液收集生物学特征重组慢病毒分化包装生产编码策略分离培养快速增殖浓度病毒原代细胞海马干细胞上清液神经球致瘤性三系转染筛选成功生长安全

[发明专利]一种人原代成骨细胞分离培养方法及试剂盒-CN202310003730.6在审
发明人：郭燕;陈菲;张琰;杨铁林 -专利权人：西安交通大学
申请日： 2023-01-03 - 公布日： 2023-05-09 - 主分类号： C12N5/077 文献下载
摘要：本发明涉及人原代成骨细胞分离和培养技术领域，尤其涉及一种人原代成骨细胞分离培养方法及试剂盒，其试剂盒包括洗涤液A、洗涤液B、组织消化液A、组织消化液B和成骨细胞培养液，洗涤液A包括PBS、青霉素、链霉素以及庆大霉素本发明将外植体培养法和胶原酶消化法相结合，将消化下来的人成骨细胞和人松质骨碎片共同培养，加快了成骨细胞从松质骨中爬出的速度，提高了人原代成骨细胞的分离和培养效率。
一种人原代成骨细胞分离培养方法试剂盒

[发明专利]利用人类皮肤黑色素细胞分析美白剂毒性和功效的方法-CN200810220666.2无效
发明人：程树军 -专利权人：程树军;广东出入境检验检疫局检验检疫技术中心
申请日： 2008-12-31 - 公布日： 2009-09-16 - 主分类号： G01N21/31 文献下载
摘要：一种利用原代培养的人皮肤黑色素细胞对美白化学物质进行毒性和功效分析的实验方法：1.原代人皮肤黑色素细胞培养鉴定；2.利用原代人黑色素细胞对美白化学物质进行毒性分析；3.利用原代人黑色素细胞对美白化学物质的功效本方法具有以下优点：体外培养的人黑色素细胞分裂增殖能力强、标准化程度高、批间差异小，具有与体内相同的产生黑色素颗粒的功能；利用健康人黑色素细胞比动物或人源的黑色素瘤细胞获得的结果更可信；从定性和定量两方面评价待测物质的毒性作用和美白功效
利用人类皮肤黑色素细胞分析美白剂毒性功效方法

[发明专利]一种人原发性皮肤鳞状上皮细胞癌肿瘤干细胞的动物模型建立方法-CN201310087025.5有效
发明人：邱启裕;全欣鑫 -专利权人：邱启裕
申请日： 2013-03-19 - 公布日： 2013-08-14 - 主分类号： A61K35/36 文献下载
摘要：本发明涉及一种人原发性皮肤鳞状上皮细胞癌肿瘤干细胞的动物模型建立方法，包括：将收集的临床病例皮肤鳞状细胞癌组织制成单细胞悬液，分离出CD31-CD24-CD45-CD61-CD133+肿瘤干细胞群，再和1x106人原代成纤维细胞，1x106人原代内皮细胞悬混在基质胶中，再将其注射至经人性化裸鼠皮下致瘤部位的微环境中。
一种原发性皮肤上皮细胞癌肿干细胞动物模型建立方法

[发明专利]一种原代汗腺细胞条件培养基及原代汗腺细胞培养方法-CN202111407515.X有效
发明人：项江兵;孙晓艳;付小兵 -专利权人：中国人民解放军总医院
申请日： 2021-11-24 - 公布日： 2023-10-10 - 主分类号： C12N5/071 文献下载
摘要：本发明提供了一种原代汗腺细胞条件培养基及原代汗腺细胞培养方法，其中，所述原代汗腺条件细胞培养基包括：细胞基础培养基、血清、Glutamax、缓冲液、细胞培养添加剂、青霉素/链霉素、表皮生长因子、碱性成纤维细胞因子本发明在原代汗腺细胞基础培养基中添加有表皮细胞生长因子、碱性成纤维细胞生长因子、NF‑κB激动剂及ROCK抑制剂。通过这些生长因子和小分子的组合，以实现人原代汗腺细胞在二维条件下的体外长期扩增培养，并在传代中维持其自身的生物学特性，延缓原代汗腺细胞的衰老进程，为快速大量制备高质量的、可移植用人汗腺细胞，满足大规模临床治疗的需求提供了前提条件
一种汗腺细胞条件培养基细胞培养方法

[发明专利]一种人羊水干细胞系的建立方法-CN200910023046.4无效
发明人：王华岩;陈帅;王晗;窦忠英 -专利权人：西北农林科技大学
申请日： 2009-06-25 - 公布日： 2010-12-29 - 主分类号： C12N5/08 文献下载
摘要：本发明涉及一种人羊水干细胞系的建立方法，该方法包括以下步骤：1)羊水干细胞的原代分离培养；2)将分离培养的原代羊水干细胞进行分离纯化；3)将分离得到的羊水干细胞经过单克隆筛选和扩增培养，建立羊水干细胞系本发明提供了一种快速、有效、安全、可实现人羊水干细胞体外长期扩增、可为组织工程研究提供新的种子细胞来源以及有望作为种子细胞进行临床应用的人羊水干细胞系的建立方法。
一种羊水细胞系建立方法

[发明专利]原发性中枢神经系统淋巴瘤原代细胞的培养方法及专用培养基-CN202210412486.4在审
发明人：李文斌;郑晓红;陈峰;王灿 -专利权人：首都医科大学附属北京天坛医院
申请日： 2022-04-19 - 公布日： 2022-07-22 - 主分类号： C12N5/09 文献下载
摘要：本发明公开了原发性中枢神经系统淋巴瘤(PCNSL)原代细胞的培养方法及专用培养基。所述专用培养基的成分包括：DMEM/F12，神经基础培养基，N2添加剂，B27添加剂，2‑巯基乙醇，人胰岛素，谷氨酰胺，丙酮酸钠，最低基本培养基，表皮细胞生长因子，碱性成纤维细胞生长因子和青霉素‑链霉素本发明进一步公开了采用该专用培养基获得PCNSL原代细胞的培养方法。采用本发明的PCNSL原代细胞的专用培养基及其培养方法能够得到PCNSL的原代细胞，可用于PCNSL发生发展的机制研究和抗肿瘤药物筛选，同时为后续培养PCNSL细胞系奠定了基础。
原发性中枢神经系统淋巴瘤细胞培养方法专用培养基