本发明涉及分子生物学领域，尤其涉及一种双功能亚甲基四氢叶酸脱氢酶/环化酶及其多克隆抗体。双功能亚甲基四氢叶酸脱氢酶/环化酶的多克隆抗体的制备方法，包括步骤：1)以氨基酸序列如SEQ ID No.1所示的双功能亚甲基四氢叶酸脱氢酶/环化酶为抗原，免疫小鼠制备抗血清；2)纯化抗血清得到双功能亚甲基四氢叶酸脱氢酶/环化酶的多克隆抗体。本发明利用PCR技术在喜冷杆菌属Cryobacterium中扩增得到双功能亚甲基四氢叶酸脱氢酶/环化酶基因，并通过基因工程技术得到Ecoli BL21‑pET21a‑BMTHC重组菌株，诱导表达重组菌株得到双功能亚甲基四氢叶酸脱氢酶/环化酶蛋白，该蛋白具有较好的低温耐受，而且以双功能亚甲基四氢叶酸脱氢酶/环化酶为抗原成功得到双功能亚甲基四氢叶酸脱氢酶/环化酶的多克隆抗体。
本发明公开了一种面包乳杆菌来源的乳酸脱氢酶，其乳酸脱氢酶的基因序列如SEQ ID No.1所示，乳酸脱氢酶的蛋白质序列如SEQ ID No.2所示。所述乳酸脱氢酶的来源是面包乳杆菌。所述乳酸脱氢酶具有将酮酸转化为乳酸的活性，可用于乳酸的制备、体外诊断试剂盒的开发。本发明得到的一种面包乳杆菌来源的乳酸脱氢酶，可通过大肠杆菌原核表达和真核表达系统获得，并制备纯酶或粗酶液或用于生物催化反应。利用制得的乳酸脱氢酶，在磷酸盐缓冲液体系中，在25℃条件下，可将丙酮酸转化为乳酸，其转化率达到了94%以上。
本发明公开了一种坎德勒氏乳杆菌来源的乳酸脱氢酶，其乳酸脱氢酶的基因序列如SEQ ID No.1所示，乳酸脱氢酶的蛋白质序列如SEQ ID No.2所示。所述乳酸脱氢酶的来源是坎德勒氏乳杆菌。所述乳酸脱氢酶具有将酮酸转化为乳酸的活性，可用于D‑乳酸的制备、体外诊断试剂盒的开发。本发明得到的一种坎德勒氏乳杆菌来源的乳酸脱氢酶，可通过大肠杆菌原核表达和真核表达系统获得，并制备纯酶或粗酶液或用于生物催化反应。利用制得的乳酸脱氢酶，在磷酸盐缓冲液体系中，在25℃条件下，可将丙酮酸转化为乳酸，其转化率达到了93%以上。
本发明公开了一种3‑甾酮‑Δ1‑脱氢酶突变体、编码基因、载体及应用，属于酶工程技术领域。本发明的3‑甾酮‑Δ1‑脱氢酶突变体，由氨基酸序列如SEQ ID NO.1所示的3‑甾酮‑Δ1‑脱氢酶突变体的第214位和/或第499位经定点突变获得。本发明通过多序列氨基酸比对，进行定点突变，提高了3‑甾酮‑Δ1‑脱氢酶的催化效率，进一步提高了3‑甾酮‑Δ1‑脱氢酶产量。本发明构建的3‑甾酮‑Δ1‑脱氢酶的重组大肠杆菌可将3‑甾酮‑Δ1‑脱氢酶酶活较出发菌株提高1.5倍，改造后的基因工程菌产酶能力显著提高，更适合工业应用，可降低生产成本，提高生产效率。
