同时检测三种链球菌的引物组合,组成为:SEQ ID MO:1、2的检测无乳链球菌的上下游引物,SEQ ID MO:3、4的检测停乳链球菌链球菌的上下游引物,SEQ ID MO:5、6的检测海豚链球菌的上下游引物一种试剂盒,由DNA提取试剂和PCR反应试剂组成,DNA提取试剂由TE缓冲液、蛋白酶K、氯仿、异丙醇、乙醇、双蒸水组成;PC反应试剂含有反应缓冲液、dNTPs、DNA聚合酶、所述6种引物、去离子水。同时检测所述三种链球菌的方法,用所述提取试剂提取样品中的DNA,用所述反应试剂对所述DNA作PCR扩增,所述扩增产物作凝胶电泳。本发明能同时检测所述三种链球菌,检测简便、快速、灵敏度高、特异性强,适用于水生动物大规模分子流行病学调查分析及水产品的质量安全检测需求。
本发明提供了一种胆盐水解酶基因,该基因来源于寡糖乳杆菌,该基因的核苷酸序列如SEQ ID No:1、SEQ ID No:3或SEQ ID No:5所示。本发明提供的寡糖乳杆菌CGMCC No.26137对胆盐有很高的水解活性,属于对胆盐高耐受,高酶活的菌株。本发明提供了三种新的胆盐水解酶基因,其异源表达的三种胆盐水解酶对牛磺酸胆盐的酶活性极强。
本发明提供一种同时检测三种链球菌的三重实时荧光PCR方法及试剂盒,试剂盒包括:无乳链球菌的检测引物对如序列表Seq ID No.1和2所示及探针如序列表Seq ID No.3所示,停乳链球菌的检测引物对如序列表Seq ID No.4和5所示及探针Seq ID No.6所示,海豚链球菌的检测引物对如序列表Seq ID No.7和8及探针Seq ID No.9所示、三种阳性对照品如序列表Seq ID No.16、