[发明专利]一种因毒性蛋白基因泄露表达克隆方法在审
| 申请号： | 202110231343.9 | 申请日： | 2021-03-02 |
| 公开（公告）号： | CN112980863A | 公开（公告）日： | 2021-06-18 |
| 发明（设计）人： | 雍金贵;崔康乐;王维坤;骆晓雯;纪世春 | 申请（专利权）人： | 通用生物系统（安徽）有限公司 |
| 主分类号： | C12N15/70 | 分类号： | C12N15/70;C12N15/62;C12R1/19 |
| 代理公司： | 合肥正则元起专利代理事务所(普通合伙) 34160 | 代理人： | 刘生昕 |
| 地址： | 239000 安徽省滁*** | 国省代码： | 安徽;34 |
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| 摘要： | 本发明公开一种因毒性蛋白基因泄露表达克隆方法，包括如下步骤：步骤S1、将CcdB蛋白C端加SsrA多肽序列；步骤S2、通过PCR扩增方法得到基因片段，再利用Gibson重组到目标载体PUC57构建全序列；步骤S3、将目的基因序列连接克隆进入表达载体后，转化大肠杆菌，培养12‑16h，观察长斑情况以及进行PCR菌落筛选阳性克隆，同时抽提质粒测序，验证序列；可以在酵母中克隆，酵母属于真核生物，可以克隆绝大多数毒性蛋白，通过先在酵母中将基因克隆出，再抽提出酵母质粒，提高质粒浓度转化大肠杆菌进行质粒扩增，进行下游实验。 | ||
| 搜索关键词： | 一种 毒性 蛋白 基因 泄露 表达 克隆 方法 | ||
【主权项】：
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