[发明专利]一种携带p53、p14ARF双抑癌基因表达盒的腺病毒的构建方法在审
| 申请号： | 201910826001.4 | 申请日： | 2019-09-03 |
| 公开（公告）号： | CN110499329A | 公开（公告）日： | 2019-11-26 |
| 发明（设计）人： | 黄映辉;王弘扬;马羚 | 申请（专利权）人： | 黄映辉 |
| 主分类号： | C12N15/861 | 分类号： | C12N15/861;C12N15/66;A61K48/00;A61P35/00 |
| 代理公司： | 11203 北京思海天达知识产权代理有限公司 | 代理人： | 刘萍<国际申请>=<国际公布>=<进入国 |
| 地址： | 100124 北京*** | 国省代码： | 北京;11 |
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| 摘要： | 本发明公开了一种携带p53基因和p14ARF基因重组腺病毒的构建方法。腺病毒‑p53(Ad‑p53)载体介导的癌症基因治疗已经应用于临床治疗。然而p53高表达造成下游蛋白mdm2的积累，从而对p53进行负反馈调节这一机制，导致了Ad‑p53载体难以在肿瘤细胞中高表达外源性p53蛋白。但p14ARF可通过与蛋白mdm2结合正向调控p53的表达。本发明构建了编码这两种蛋白的双抑癌基因表达盒腺病毒载体(Adp14/p53)，结果表明Adp14/p53与Adp53相比p53蛋白半衰期增加约2.5倍，p53初始蛋白合成率高2倍，p53下游靶基因mdm2、p21waf1、bax的RNA和蛋白表达增加，体内外细胞凋亡增加，抑制了肿瘤细胞在体内诱导新生血管的形成，明显降低肿瘤细胞的活性。 | ||
| 搜索关键词： | 肿瘤细胞 蛋白 高表达 腺病毒 构建 癌症基因治疗 蛋白合成率 负反馈调节 腺病毒载体 蛋白表达 基因重组 临床治疗 体内诱导 细胞凋亡 新生血管 抑癌基因 正向调控 靶基因 半衰期 表达盒 外源性 介导 体内 携带 积累 应用 | ||
【主权项】：
1.一种携带p53、p14ARF双抑癌基因表达盒的腺病毒的构建方法，其特征在于：/n(1)携带p53基因、p14ARF基因片段的穿梭质粒的构建；/n(2)穿梭质粒与缺失E1/E3基因的腺病毒骨架质粒共转染QBI-293A细胞；/n(3)收获带p53、p14ARF双抑癌基因的重组腺病毒。/n
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