[发明专利]一种急性肝衰竭小鼠肝脏全免疫细胞特征图谱的绘制方法

摘要

本发明涉及肝脏全免疫细胞特征图谱研究，旨在提供一种急性肝衰竭小鼠肝脏全免疫细胞特征图谱的绘制方法。包括步骤：小鼠肝脏全免疫细胞的提取；质谱流式抗体的标记；免疫细胞抗体染色；质谱流式分析。本发明能够在保证细胞纯度的基础上，尽可能的去除肝脏实质细胞，分离出高得率的小鼠肝脏全免疫细胞。本发明分离的小鼠肝脏全免疫细胞得率在高于研磨法得率，且细胞活率大于传统研磨法。本发明根据肝脏、肺脏中免疫细胞特点，创新性地使用试剂盒以稳定金属同位素与抗体连接，同时基于通道干扰最小原则设计质谱流式通道，实现全面小鼠对肝脏全免疫细胞的分类和功能进行描述，最多可同时检测43个标志物，能够观察到小鼠肝脏全免疫细胞的动态改变。

主权项

1.一种急性肝衰竭小鼠肝脏全免疫细胞特征图谱的绘制方法，其特征在于，包括以下步骤：(1)小鼠肝脏全免疫细胞的提取取因急性肝衰竭而自然死亡的新鲜小鼠尸体，摘取肝脏并灌流出其内部的血液；将肝脏剪碎后以酶混合液消化半个小时，再进行密度梯度离心和红细胞裂解，得到纯净的小鼠肝脏全免疫细胞；(2)质谱流式抗体的标记使用美国Fluidigm公司的MaxPAR X8抗体偶联试剂盒，以稳定的金属同位素与小鼠肝脏免疫细胞表面标志物抗体连接，得到标记抗体；(3)免疫细胞抗体染色将分离得到的小鼠肝脏全免疫细胞与标记抗体进行孵育，标记免疫细胞；(4)质谱流式分析将标记后的小鼠肝脏全免疫细胞在质谱流式上机分析，采用t‑SNE和X‑shift算法对所得数据进行分析；然后将不同的细胞亚群的多个检测抗体的表达分布在同一张热图上，并通过viSNE图表现不同标志物的表达以及不同细胞亚群的分布，以此表现小鼠肝脏全免疫细胞的分类图谱。