[发明专利]一种制备桑青枯菌抗体的方法及其在DAS-ELISA检测方法上的应用在审
申请号: | 201910475412.3 | 申请日: | 2019-06-03 |
公开(公告)号: | CN110386979A | 公开(公告)日: | 2019-10-29 |
发明(设计)人: | 王俊;王金正;苏佳威;盛晟;吴福安 | 申请(专利权)人: | 江苏科技大学 |
主分类号: | C07K16/12 | 分类号: | C07K16/12;C12N15/06;G01N33/577;G01N33/569 |
代理公司: | 南京经纬专利商标代理有限公司 32200 | 代理人: | 楼高潮 |
地址: | 212003*** | 国省代码: | 江苏;32 |
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摘要: | 一种制备桑青枯菌抗体的方法及其在DAS‑ELISA检测方法上的应用。以BALA/c小鼠为免疫动物,采用青枯菌活体菌株免疫,制备出抗青枯菌的单克隆抗体并用于构建青枯菌的DAS‑ELISA检测方法。使用菌悬液浓度为106‑108CFU/mL的活体青枯菌菌悬液免疫小鼠,并筛选出杂交瘤细胞,制备桑青枯菌DAS‑ELISA试剂盒,其中,0.1‑10%的脱脂奶粉或仅含有蛋白的药剂如牛血清白蛋白作为封闭液,TMB显色液时间为10‑60min,辣根过氧化氢酶标记的抗体作用时间为10‑60min,辣根过氧化氢酶标记的抗体稀释倍数为1:100‑1:5000,捕获抗体稀释倍数为1:100‑1:5000。本技术对桑青枯菌具有良好的检测灵敏度最低检测限为3.13×103CFU/mL,可实现在2.5h内对桑青枯菌的检测,且操作简便,检测快速。 | ||
搜索关键词: | 制备 辣根过氧化氢酶 检测 菌抗体 牛血清白蛋白 单克隆抗体 检测灵敏度 杂交瘤细胞 捕获抗体 菌菌悬液 抗体稀释 抗体作用 免疫动物 免疫小鼠 脱脂奶粉 封闭液 菌活体 菌悬液 构建 活体 菌株 稀释 小鼠 应用 蛋白 筛选 | ||
【主权项】:
1.一种制备桑青枯菌抗体的方法,其特征在于,以菌悬液浓度为106‑108CFU/mL的活体青枯菌菌悬液作为免疫抗原,对小鼠免疫处理后,取达到10000以上效价后的小鼠脾脏细胞与小鼠骨髓瘤细胞进行细胞融合,筛选出分泌抗体蛋白的杂交瘤细胞,并对抗体蛋白进行纯化处理,即得桑青枯菌抗体9G9、1G9和2H5。
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- R·卡桑;D·约翰斯通;L·萨沃德;J·A·乔治;J·贝里 - CNJ控股公司
- 2013-11-29 - 2019-05-21 - C07K16/12
- 提供了用于在受试者中治疗或预防艰难梭菌感染的组合物和方法。所述组合物包含针对艰难梭菌毒素B的抗体。所述方法提供以有效地减少或消除或预防艰难梭菌细菌感染的复发的量向受试者施用抗体。
- 一种抗内氏放线菌卵黄抗体及其制备方法-201510882988.3
- 刘英杰;李瀚源;陈娟;刘云 - 河南大学
- 2015-12-07 - 2019-05-21 - C07K16/12
- 本发明属于生物制品制备技术领域,具体涉及一种抗内氏放线菌卵黄抗体及其制备方法。抗内氏放线菌卵黄抗体的制备过程,具体包括:制备灭活的内氏放线菌作为抗原、免疫接种蛋鸡、分离纯化卵黄抗体等步骤。经过实际检验,本发明所制备的抗内氏放线菌卵黄抗体能显著抑制内氏放线菌的生长,并能有效清除内氏放线菌单菌生物膜的形成,并对其生物膜产酸有明显抑制作用,制备的抗内氏放线菌卵黄抗体对黏性放线菌具有一定的交叉免疫性。本发明具有容易制备、成本低廉等优点,将其添加到漱口液、牙膏、含片、奶制品、糕点、饮料、保健品等日常洗护用品或食品饮料时,对于内氏放线菌所引起的龋齿、牙龈炎、牙周炎的预防和治疗具有较好地应用效果。
- 一种兔肺炎型金黄色葡萄球菌卵黄抗体的制备方法-201910173878.8
- 王锦祥;谢喜平;桑雷;孙世坤;陈冬金;陈岩锋 - 福建省农业科学院畜牧兽医研究所
- 2019-03-08 - 2019-04-26 - C07K16/12
- 本发明公开了一种兔肺炎型金黄色葡萄球菌卵黄抗体的制备方法,属于生物技术领域。本发明的方法包括以下步骤:(1)免疫用兔肺炎型金黄色葡萄球菌组织灭活疫苗的制备;(2)蛋鸡免疫;(3)高效价卵黄抗体的提纯。本发明制备的兔肺炎型金黄色葡萄球菌卵黄抗体对兔肺炎型金黄色葡萄球菌的感染具有良好的预防效果。同时,所述的方法操作简便,制备的卵黄抗体效价高、成本低、易于批量生产,具有很好的应用前景。
- 一种巴氏杆菌蛋白的多克隆抗体及单克隆抗体的制备-201910152350.2
- 王凤阳;黄海峰;杜丽 - 海南大学
- 2019-02-28 - 2019-04-23 - C07K16/12
- 本发明公开了一种巴氏杆菌蛋白的多克隆抗体及单克隆抗体的制备,采用BCA蛋白浓度方法构建标准蛋白浓度的标准曲线,通过标准曲线计算待测toxA‑N纯化蛋白的浓度,制备抗原,再进行多杀性巴氏杆菌毒素toxA‑N蛋白多克隆抗体和单克隆抗体的制备。通过生物技术方法将纯化后的toxA‑N蛋白制备成抗原,通过对大白兔的皮下注射及昆明鼠的腹腔注射,刺激机体发生免疫应答,产生对应宿主的抗体。将制备多克隆抗体进行倍比稀释,在1:6400时P/N仍然>2,而单克隆抗体因其特异性高,稀释至1:64000时P/N依旧>2.5,完全符合制备抗体的要求。
- 一种免疫抗体及其制备方法-201910036677.3
- 吴勇刚 - 深圳康体生命细胞技术有限公司
- 2019-01-15 - 2019-04-16 - C07K16/12
- 本发明涉及免疫抗体技术领域,且公开了一种免疫抗体及其制备方法,通过从兔子体内抽取样本血液进行多次免疫所产生的抗体,具体步骤:步骤一:动物的选择,步骤二:抗原的选择,步骤三:佐剂和抗原乳剂的制备,步骤四:免疫,步骤五:抗血清的制备。该免疫抗体及其制备方法,通过对兔子进行三个阶段的免疫,能够制备出高纯度的免疫抗体,特异性强、效价高和亲和力强,通过规范的从兔子的体内取样品血,使得取出的免疫抗体不受到细菌污染,提高了免疫抗体的纯度。
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