[发明专利]一种微生物传感器的构建方法及其应用方法在审
| 申请号： | 201910376520.5 | 申请日： | 2019-05-07 |
| 公开（公告）号： | CN110007072A | 公开（公告）日： | 2019-07-12 |
| 发明（设计）人： | 吕雪飞;张静;邓玉林;陶慧;杨元展 | 申请（专利权）人： | 北京理工大学 |
| 主分类号： | G01N33/533 | 分类号： | G01N33/533;G01N21/64 |
| 代理公司： | 北京宣言律师事务所 11509 | 代理人： | 李知伦 |
| 地址： | 100044 *** | 国省代码： | 北京;11 |
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| 摘要： | 本发明提供了一种微生物传感器的构建方法及应用方法，步骤一构建待测氨基酸缺陷型菌株；步骤二截取LuxI/LuxR循环放大线路所需目的基因片段连接，得到含有基于LuxI/LuxR系统的循环放大线路的质粒，将重组质粒转化到氨基酸缺陷型菌株中，使报告基因片段重复表达；步骤三将菌株培养至对数生长期，在培养基中饥饿培养。本发明利用循环放大待测氨基酸缺陷型菌株作为微生物传感器，以与蛋白质标志物具有高特异性和高亲和力结合的核酸适配体作为“桥梁”，将对蛋白标志物的检测转化为对待测氨基酸的检测，利用构建的微生物传感器实现了对大分子生物标志物的检测，并且结合循环放大系统作为信号放大手段，大大提高了定量检测的灵敏度。 | ||
| 搜索关键词： | 微生物传感器 构建 氨基酸缺陷 菌株 放大 检测 蛋白质标志物 重组质粒转化 大分子生物 蛋白标志物 对数生长期 核酸适配体 报告基因 定量检测 放大系统 高亲和力 饥饿培养 菌株培养 目的基因 片段连接 片段重复 培养基 标志物 灵敏度 氨基酸 截取 质粒 应用 桥梁 转化 | ||
【主权项】：
1.一种微生物传感器的构建方法，其特征在于，包括以下步骤：步骤一 构建待测氨基酸的缺陷型菌株；步骤二 构建以荧光蛋白基因为报告基因的质粒，截取LuxI/LuxR循环放大线路所需目的基因片段，连接构建，得到含有基于LuxI/LuxR系统的循环放大线路的质粒，将重组质粒转化到感受态的由步骤一中获得的菌株中，使报告基因片段重复表达，获得具有信号循环放大能力的微生物传感器；步骤三 将步骤二中获得的菌株培养至对数生长期，在培养基中饥饿培养，耗尽菌株中内源性的待测氨基酸分子。
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- 本发明公开的用于干式荧光/胶体金试剂卡检测的温控仓，包括温控仓仓体，温控仓仓体侧壁上安装有M个温控组件，M≥1；其中，温控组件包括帕尔贴，帕尔贴四周与温控仓仓体侧壁之间设置有隔热垫。本发明通过螺丝将帕尔贴锁紧在两个散热翅片中间，帕尔贴四周由隔热垫包裹，以防冷热面温度串扰。两个散热片上都有散热风扇将帕尔贴产生的热和冷快速散开，加速与相应环境中的空气的热交换作用。通过改变帕尔贴两极的电流方向来转换帕尔贴加热或制冷面，第一散热片和第一风扇位于温控仓内部，将帕尔贴产生的热或冷通过仓内空气分散在温控仓内，使温控仓保持在特定的温度范围内。
- 一种干式荧光/胶体金试剂卡的配套检测设备及检测方法-201910476939.8
- 杨金保;张平;周楠;卢华健 - 思库科技（广州）有限公司
- 2019-06-03 - 2019-07-23 - G01N33/533
- 本发明公开的一种干式荧光/胶体金试剂卡的配套检测设备，包括进卡装置、承载器、储存仓、温控仓；其中，能够横向移动和纵向移动的储存仓设置在温控仓中，进卡装置、承载器均安装在主安装立板上，待检测干式荧光/胶体金试剂卡放入进卡装置，然后通过承载器运输到温控仓中的储存仓中；所述温控仓包括温控仓仓体，温控仓仓体侧壁上安装有一个以上的温控组件；其中，温控组件包括帕尔贴，帕尔贴四周与温控仓仓体侧壁之间设置有隔热垫。本发明通过采用垂直和横向双向运动的堆叠式储存仓将处于反应中的试剂卡收纳其中，储存仓再被一个密闭的温控仓包裹，同时配套温控模块，进而使得处于反应中的试剂卡可以在一个温度相对稳定且可控的环境内进行反应，且空间利用率较高。
- 一种CKAP4标记抗体-荧光微球复合物的制备方法及其应用-201910256743.8
- 王云龙;张璐;李玉林;程蕾;王继创;邓黎黎 - 河南省生物工程技术研究中心有限公司;河南省生物工程技术研究中心
- 2019-04-01 - 2019-07-12 - G01N33/533
- 本发明涉及荧光免疫层析技术领域，具体涉及一种CKAP4标记抗体‑荧光微球复合物的制备方法及其应用。一种CKAP4标记抗体‑荧光微球复合物的制备方法，包括如下步骤：(1)用EDC振荡活化荧光微球；(2)使荧光微球与CKAP4标记抗体偶联；(3)加入5％‑15％BSA溶液振荡封闭，离心，去上清；(4)加入保护液，超声，振荡偶联，离心，去上清；(5)加入5％‑15％BSA溶液，振荡封闭，振荡结束后离心，去上清，沉淀用保护液吹散，即得所述CKAP4标记抗体‑荧光微球复合物溶液。该CKAP4标记抗体‑荧光微球复合物用于制备免疫荧光层析试纸条可实现CKAP4的快速检测，线性范围宽。
- 一种微生物传感器的构建方法及其应用方法-201910376520.5
- 吕雪飞;张静;邓玉林;陶慧;杨元展 - 北京理工大学
- 2019-05-07 - 2019-07-12 - G01N33/533
- 本发明提供了一种微生物传感器的构建方法及应用方法，步骤一构建待测氨基酸缺陷型菌株；步骤二截取LuxI/LuxR循环放大线路所需目的基因片段连接，得到含有基于LuxI/LuxR系统的循环放大线路的质粒，将重组质粒转化到氨基酸缺陷型菌株中，使报告基因片段重复表达；步骤三将菌株培养至对数生长期，在培养基中饥饿培养。本发明利用循环放大待测氨基酸缺陷型菌株作为微生物传感器，以与蛋白质标志物具有高特异性和高亲和力结合的核酸适配体作为“桥梁”，将对蛋白标志物的检测转化为对待测氨基酸的检测，利用构建的微生物传感器实现了对大分子生物标志物的检测，并且结合循环放大系统作为信号放大手段，大大提高了定量检测的灵敏度。
- BrdU标记免疫荧光检测细胞增殖的改良方法-201610646905.5
- 杨琴;余萍萍 - 杨琴;余萍萍
- 2016-08-09 - 2019-07-12 - G01N33/533
- 本发明公开了一种免疫荧光检测BrdU标记增殖细胞的改良方法。将变性温度固定在4℃，复性统一采用0.01M Tris‑HCL处理，之后进行单标、双标及三标染色，并与常规方法进行比较。结果显示本发明方法具有非常好的染色效果，成功率高，重复性好，操作简单且节约实验时间。
- 专利分类
