[发明专利]一种高通量筛选高产油裂殖壶菌突变体的方法

摘要

本发明属于基因工程技术领域，公开了一种高通量筛选高产油裂殖壶菌突变体的方法，筛选条件优化：进行裂殖壶菌尼罗红染色条件优化、选用单位细胞密度油脂量作为筛选依据、确定尼罗红的染色时间点；高通量筛选；利用紫外(UVC)诱变建立随机突变体库，再进行96孔板接种培养、OD595测量、尼罗红染色、数据分析、复筛；对复筛中的FI/OD₅₉₅前三的突变体，进行表型验证，以证实筛选方案的正确性。本发明操作简单，更准确，目的性强；高通量作业，工作量较小，适合大规模育种；筛选效率高，筛选得到高产油、高产DHA突变株整个流程需花费3周时间，大大缩短育种周期。

主权项

1.一种高通量筛选高产油裂殖壶菌突变体的方法，其特征在于，所述高通量筛选高产油裂殖壶菌突变体的方法包括：步骤一，接种培养：吸取筛选培养基于96孔板中，并挑取少量突变体单克隆于对应96孔板孔中，挑完后，让单克隆均匀分散于培养基中，在恒温摇床中培养；步骤二，OD595测量：将96孔板取出，吹扫各孔培养物后，利用多功能酶标仪高通量检测595nm吸光值；步骤三，尼罗红染色：利用排枪加20％DMSO水溶液于96孔黑色酶标板中，再将96孔板中的培养物转于96孔黑色酶标板中，加入后用排枪轻吹，再加入0.1mg/ml尼罗红试剂，然后用排枪轻吹混匀；锡箔纸包好后放于恒温水浴锅中水浴；孵育结束后取出酶标板，利用多功能酶标仪检测激发光波长为485±20nm，发射光波长为595±10nm的荧光强度，并扣除未染色菌液的荧光强度；步骤四，数据分析：将每两板96孔板中的荧光值与OD595值的比值的最大或最小的各五个突变体转板保存，并记录对应单克隆板的编号；步骤五，复筛：挑选步骤四中的FI/OD₅₉₅前五的突变体进行复筛。