[发明专利]体外培养制备AFP单克隆抗体的方法及其应用在审
| 申请号： | 201910203409.6 | 申请日： | 2019-03-18 |
| 公开（公告）号： | CN109897880A | 公开（公告）日： | 2019-06-18 |
| 发明（设计）人： | 孙静静;程雷显;周伟伟;周雷鸣;赵巧辉;李桂林;付光宇;吴学炜 | 申请（专利权）人： | 郑州伊美诺生物技术有限公司 |
| 主分类号： | C12P21/08 | 分类号： | C12P21/08;G01N33/577;G01N33/574 |
| 代理公司： | 郑州异开专利事务所(普通合伙) 41114 | 代理人： | 王霞 |
| 地址： | 450016 河南省郑州市*** | 国省代码： | 河南;41 |
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| 摘要： | 本发明公开了一种体外培养制备AFP单克隆抗体的方法，首先复苏杂交瘤细胞，制备种子细胞；将无菌的中空纤维系统内循环系统的进液端和PBS/培养基供应瓶连接，出液端和废液瓶连接，将中空纤维系统外循环系统的进液端和PBS/培养基供应瓶连接，出端和废液瓶连接用PBS和培养基对其进行润洗；然后将种子细胞导入；培养过程中持续进行葡萄糖和乳酸的监测，去除代谢废物，同时不断补充新鲜的培养基，采用20L桶进行培养基的储备，减少操作频次；收获的培养上清进行亲和纯化后得到抗体浓度5mg/mL，纯度95%以上的单抗成品。本发明制备的单抗特异性好，灵敏度高且效价高，用于AFP化学发光检测试剂盒中，能大大提高试剂盒的灵敏度、特异性和稳定性。 | ||
| 搜索关键词： | 培养基 制备 中空纤维 种子细胞 废液瓶 进液端 灵敏度 单抗 化学发光检测试剂盒 葡萄糖 内循环系统 外循环系统 杂交瘤细胞 代谢废物 亲和纯化 体外培养 出液端 试剂盒 出端 抗体 乳酸 润洗 无菌 效价 种体 去除 复苏 储备 监测 收获 新鲜 补充 应用 | ||
【主权项】：
1.一种体外培养制备AFP单克隆抗体的方法，其特征在于：包括以下具体步骤：第一步，复苏杂交瘤细胞，制备种子细胞；第二步，将中空纤维系统内循环系统的进液端和PBS/培养基供应瓶连接，中空纤维系统内循环系统的出液端和废液瓶连接，将中空纤维系统外循环系统的进液端和PBS/培养基供应瓶连接，中空纤维系统外循环系统的出端和废液瓶连接，开启蠕动泵，用PBS和培养基对中空纤维系统进行润洗；然后将无菌处理后的种子细胞导入中空纤维系统，完成接种；第三步，进行中空纤维系统细胞培养，培养过程中持续进行葡萄糖和乳酸的监测，去除代谢废物，同时不断补充新鲜的培养基；第四步，收获的培养上清进行亲和纯化后得到抗体浓度5mg/mL，纯度95%的单抗成品。
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