[发明专利]一种提高乌菜外植体瞬时表达率的定向遗传转化方法有效
| 申请号： | 201910031307.0 | 申请日： | 2019-01-14 |
| 公开（公告）号： | CN109609544B | 公开（公告）日： | 2021-01-29 |
| 发明（设计）人： | 陈国户;汪承刚;汪健;朱世东;袁凌云;侯金锋 | 申请（专利权）人： | 安徽农业大学 |
| 主分类号： | C12N15/82 | 分类号： | C12N15/82 |
| 代理公司： | 安徽汇朴律师事务所 34116 | 代理人： | 汪蕙 |
| 地址： | 230001 *** | 国省代码： | 安徽;34 |
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| 摘要： | 本发明公开了一种操作简单、瞬时表达率高的乌菜外植体定向遗传转化方法。其特征包括以下步骤：(1)乌菜5天无菌苗，切取子叶‑子叶柄及下胚轴外植体。(2)乌菜外植体在预培养基上培养2天。(3)农杆菌(含有植物表达载体)在活化培养基上活化。(4)利用经液体共培养基湿润的无菌棉棒蘸取活化的农杆菌，定向涂抹于外植体切口处。(5)涂抹后的外植体，置于固体共培养基上，25℃暗培养2天完成共培养，即可检测瞬时表达率。本发明采用的定向遗传转化方法，具有无需液体培养农杆菌、操作简单、外植体的瞬时表达率高等优点，为高效获得乌菜转基因植株奠定基础。 | ||
| 搜索关键词： | 一种 提高 乌菜外植体 瞬时 表达 定向 遗传 转化 方法 | ||
【主权项】：
1.一种提高乌菜外植体瞬时表达率的定向遗传转化方法，其特征在于，所述方法包括以下步骤：步骤1、取5天苗龄的乌菜无菌苗，切取子叶‑子叶柄及下胚轴外植体；步骤2、将外植体置于预培养基上，25℃光照培养2天；步骤3、将含有植物表达载体的农杆菌，用接种针均匀涂布在活化培养基上，28℃恒温培养，至菌体长出，所述植物表达载体含有GUS报告基因；步骤4、用液体共培养基，将无菌棉棒湿润；步骤5、用湿润的棉棒蘸取活化的农杆菌，轻轻地定向涂抹于经过预培养的外植体切口处；步骤6、在固体共培养基表层放置一张无菌滤纸；步骤7、将涂抹后的外植体，平铺在固体共培养基上，25℃暗培养2天；步骤8、暗培养结束后，GUS化学染色外植体。
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