[发明专利]一种植物病原菌扩大培养的方法

摘要

本发明公开了一种植物病原菌（水稻稻瘟病）扩大培养的方法。主要包括病标样采集—分离纯化—初步放大培养‑浅盘发酵。它是以高粱粒为培养基质，浅盘发酵，在温度为22℃，湿度为90%以上，黑暗培养一周后即可形成大量的分生孢子。本发明中的培养配方简单，纯度高，产孢量大（可达10⁵个/克以上），储存时间长（至少2年），可用于水稻品种抗病性测试、化学药剂筛选及稻瘟病菌致病机理等科学研究。

主权项

1.一种植物病原菌扩大培养的方法，其特征在于按如下步骤进行：（1）病原菌的分离：采集水稻稻瘟病典型病样，用75%酒精消毒处理病组织30s，然后用无菌水冲洗干净，将处理后的病组织放于含有1%（w/w）阿米卡星注射液的PDA固体培养基中培养；所述PDA培养基成分是马铃薯200g、葡萄糖20g、琼脂18g、蒸馏水1000ml，分装在250ml三角瓶中；（2）斜面纯化培养：将分离出的病原菌在显微操作仪上挑单孢，每个单孢分别在PDA斜面培养基上进行培养，培养温度25℃，培养时间7‑10天；所述的PDA斜面培养基成分指的是马铃薯200g、葡萄糖20g、琼脂18g、蒸馏水1000ml，分装于试管中；（3）三角瓶扩大培养：将煮好的高粱粒装入三角瓶、500毫升的三角瓶装到瓶高1/3处，121℃,高压灭菌1h，晾凉后，将试管中的单孢菌落转移到装有高粱粒的三角瓶中，混拌均匀，培养7天；（4）浅盘发酵：将搪瓷盘用酒精或开水冲刷，然后将长满菌的三角瓶中的高粱粒掏出来，打断菌丝后，平摊在搪瓷盘上，覆盖纱布保湿，温度为22℃，湿度为90%，10‑15天即可获得产生大量分生孢子的培养体。