[发明专利]一种免疫组库高通量测序文库的构建方法在审
| 申请号： | 201810768077.1 | 申请日： | 2018-07-13 |
| 公开（公告）号： | CN108893464A | 公开（公告）日： | 2018-11-27 |
| 发明（设计）人： | 李芬香;李雪飞;王勇斯;董少玲;王晓丹 | 申请（专利权）人： | 广州华银医学检验中心有限公司 |
| 主分类号： | C12N15/10 | 分类号： | C12N15/10;C12Q1/6806;C12Q1/6869;C40B50/06 |
| 代理公司： | 北京精金石知识产权代理有限公司 11470 | 代理人： | 张黎 |
| 地址： | 510663 广东省广州市广州高新技术产业开发*** | 国省代码： | 广东;44 |
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| 摘要： | 本发明是基于5'RACE的原理，同时引入UM即分子条形码的文库构建方案，具体为在恒定区设计单引物进行逆转录，可等效扩增出所有类型TCR/BCR CDR全长序列，同时因引入UMI，可对后续的PCR或测序过程中引入的错误进行纠正。本发明可满足微量样品，低至100个细胞的建库的实验要求，并且可等效扩增出TCR/BCR的CDR全长序列。 | ||
| 搜索关键词： | 等效扩增 全长序列 引入 测序过程 测序文库 免疫组库 实验要求 微量样品 文库构建 条形码 单引物 高通量 恒定区 逆转录 构建 建库 细胞 纠正 | ||
【主权项】：
1.一种用于微量样品的免疫组库高通量测序文库的构建方法，其特征在于，具体包括以下步骤：(1)、cDNA模板的制备；1)细胞裂解；2)mRNA分离、逆转录、模板替换及UDG酶处理；(2)、第一次PCR反应；(3)、第二次PCR反应；(4)、测序文库构建；1)、将步骤3)得到的PCR产物D连接测序接头，得到测序文库样品；2)、对测序文库样品筛选并质检。
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