[发明专利]胞外表达L-天冬氨酸α-脱羧酶工程菌的构建方法及其应用在审
| 申请号： | 201810647059.8 | 申请日： | 2018-06-22 |
| 公开（公告）号： | CN108330096A | 公开（公告）日： | 2018-07-27 |
| 发明（设计）人： | 冯志彬;张娟;陈国忠 | 申请（专利权）人： | 鲁东大学 |
| 主分类号： | C12N1/21 | 分类号： | C12N1/21;C12N15/60;C12N15/70;C12P13/06;C12R1/19 |
| 代理公司： | 北京中济纬天专利代理有限公司 11429 | 代理人： | 马国冉 |
| 地址： | 264025 山东*** | 国省代码： | 山东;37 |
| 权利要求书： | 暂无信息 | 说明书： | 暂无信息 |
| 摘要： | 本发明涉及一种胞外表达L‑天冬氨酸α‑脱羧酶工程菌的构建方法及应用该菌生产β‑丙氨酸。本发明克隆高活性的L‑天冬氨酸α‑脱羧酶基因，和信号肽基因共表达，转化大肠杆菌感受态细胞，构建信号肽介导L‑天冬氨酸α‑脱羧酶的胞外分泌工程菌，并配合发酵调控措施增加L‑天冬氨酸α‑脱羧酶的胞外分泌量，所得L‑天冬氨酸α‑脱羧酶酶液用于转化L‑天冬氨酸生产β‑丙氨酸。本发明实现酶的胞外释放，减少蛋白在胞内过度堆积对细胞产生的毒性，有利于底物同酶的接触；直接采用发酵液催化L‑天冬氨酸生产β‑丙氨酸，无需破碎细胞提取纯酶进行反应；且采用底物流加的方式催化合成β‑丙氨酸，避免催化过程中产生多量的盐，产品纯度高。 | ||
| 搜索关键词： | 天冬氨酸 丙氨酸 脱羧酶 胞外表达 酶工程 构建 脱羧 大肠杆菌感受态细胞 胞外分泌量 脱羧酶基因 信号肽基因 胞外分泌 产品纯度 催化过程 催化合成 发酵调控 构建信号 破碎细胞 细胞产生 发酵液 高活性 工程菌 共表达 纯酶 催化 底物 介导 酶液 生产 物流 应用 转化 堆积 蛋白 克隆 释放 配合 | ||
【主权项】：
1.一种胞外表达L‑天冬氨酸α‑脱羧酶工程菌的构建方法，其特征在于，所述构建方法步骤包括：克隆高活性的L‑天冬氨酸α‑脱羧酶基因，和信号肽基因共表达，转化大肠杆菌感受态细胞，构建信号肽介导L‑天冬氨酸α‑脱羧酶的胞外分泌工程菌。
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- 蔡宇杰;熊天真;蒋静;丁彦蕊;白亚军;郑晓晖 - 江南大学
- 2018-04-19 - 2019-10-25 - C12N1/21
- 本发明公开了一种工程菌及其在丹参素和丙酮酸联产中的应用，属于生物工程技术领域。本发明构建了一种新型的三酶共表达基因工程菌，该菌可应用于光学纯的3‑(3，4‑二羟基苯基)‑2‑羟基丙酸的生产。本发明选择的(D/L)‑α‑羟基羧酸脱氢酶均具有底物专一性差，光学专一性强的特点，可生产光学纯的D‑丹参素和L‑丹参素，同时联产丙酮酸。进一步地，同时敲除或强化表达大肠杆菌基因组上的相关基因促进底物的转运及减少产物的分解。本发明的生产过程简单且原料易得，杂质少，具有重要的工业应用价值。
- 一种工程菌及其在丹参素和α-酮戊二酸联产中的应用-201810352742.9
- 蔡宇杰;熊天真;蒋静;丁彦蕊;白亚军;郑晓晖 - 江南大学
- 2018-04-19 - 2019-10-25 - C12N1/21
- 本发明公开了一种工程菌及其在丹参素和α‑酮戊二酸联产中的应用，属于生物工程技术领域。本发明构建了一种新型的三酶共表达基因工程菌，该菌可应用于光学纯的3‑(3,4‑二羟基苯基)‑2‑羟基丙酸的生产。本发明选择的(D/L)‑α‑羟基羧酸脱氢酶均具有底物专一性差，光学专一性强的特点，可生产光学纯的D‑丹参素和L‑丹参素，同时联产α‑酮戊二酸。进一步地，通过敲除或强化表达大肠杆菌基因组上的相将关基因促进底物的转运及减少产物的分解，提高了重组菌的生产效率。利用本发明的重组菌转化生产丹参素和α‑酮戊二酸的方法简单且原料易得，杂质少,具有良好的工业化应用前景。
- 杀香鱼假单胞菌ExoU基因敲除突变株及其应用-201610355003.6
- 毛芝娟;王越峰;高丽婷;陈吉刚 - 浙江万里学院
- 2016-05-25 - 2019-10-25 - C12N1/21
- 本发明属于基因工程领域，涉及杀香鱼假单胞菌ExoU基因敲除突变株及其应用。所述突变株NB2011ΔExoU，保藏号为CGMCC No.12430，其制备方法为：利用同源重组基因敲除技术将杀香鱼假单胞菌野生株NB2011的ExoU基因进行基因敲除，经PCR技术筛选鉴定确定所获得的菌株为基因敲除突变株。用本发明所述的突变株进行动物实验研究其致病性，其结果是对实验动物的毒力显著降低，可应用于杀香鱼假单胞菌弱毒性疫苗。
- 一种提高大肠杆菌合成血红素的方法-201610890603.2
- 康振;陈坚;堵国成;翁焕娇 - 江南大学
- 2016-10-12 - 2019-10-25 - C12N1/21
- 本发明公开了一种提高大肠杆菌合成血红素的方法，属于代谢工程技术领域。本发明通过将来源大肠杆菌的血红素合成途径基因分成两个模块，利用拷贝数不同的质粒，将两个模块随机组合，在过量表达谷氨酰‑tRNA还原酶(hemA编码)、谷氨醛氨基转移酶(hemL编码)的基础上，强化了血红素合成途径。本发明构建的重组大肠杆菌工程菌E.coli DH5α：pUC19‑hemA‑hemL+pACYCDuet‑2‑hemB‑hemC‑hemD‑hemE+pRSFDuet‑2‑hemF‑hemG‑hemH摇瓶发酵培养48h，生产血红素0.56μM/OD细胞。本发明采用代谢工程策略，改造微生物菌株来合成目的产物血红素，为微生物法高效生产血红素奠定了一定基础。
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