[发明专利]靶向沉默KLF4基因的重组腺相关病毒的构建方法在审
申请号: | 201810419441.3 | 申请日: | 2018-05-04 |
公开(公告)号: | CN109706178A | 公开(公告)日: | 2019-05-03 |
发明(设计)人: | 孙得胜;刘虹延;欧阳瑶 | 申请(专利权)人: | 遵义医学院附属医院 |
主分类号: | C12N15/864 | 分类号: | C12N15/864;C12N15/65;A01K67/027 |
代理公司: | 贵阳中新专利商标事务所 52100 | 代理人: | 李余江 |
地址: | 563099 贵*** | 国省代码: | 贵州;52 |
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摘要: | 本发明公开了靶向沉默KLF4基因的重组腺相关病毒的构建方法,该方法先根据大鼠KLF4基因序列,设计针对大鼠特异性的siRNA序列,以pHBAAV‑U6‑MCS‑CMV‑EGFP作为空白载体,通过酶切技术构建带有GFP荧光标记的KLF4干扰腺病毒载体pHBAAV‑r‑KLF4shRNA‑GFP,进行测序分析;然后将重组质粒pHBAAV‑r‑KLF4shRNA‑GFP、包装质粒pAAV‑RC和辅助质粒pHelper共转染AAV‑293细胞,收获重组腺相关病毒rAAV1‑KLF4‑shRNA。该方法构建的靶向沉默KLF4基因的重组腺相关病毒能够在预防或治疗肺动脉高压的药物学中得到应用。 | ||
搜索关键词: | 重组腺相关病毒 靶向 构建 大鼠 药物学 治疗肺动脉高压 腺病毒载体 包装质粒 测序分析 辅助质粒 技术构建 空白载体 荧光标记 重组质粒 共转染 酶切 细胞 收获 预防 应用 | ||
【主权项】:
1.一种靶向沉默KLF4基因的重组腺相关病毒的构建方法,其特征在于包括以下步骤:S1.根据大鼠KLF4基因序列,设计针对大鼠特异性的siRNA序列,以pHBAAV‑U6‑MCS‑CMV‑EGFP作为空白载体,通过酶切技术构建带有GFP荧光标记的KLF4干扰腺病毒载体pHBAAV‑r‑KLF4 shRNA‑GFP,进行测序分析;S2.将重组质粒pHBAAV‑r‑KLF4 shRNA‑GFP、包装质粒pAAV‑RC和辅助质粒pHelper共转染AAV‑293细胞,收获重组腺相关病毒rAAV1‑KLF4‑shRNA。
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- 本发明是一种携带BCMA突变的重组腺相关病毒载体及其构建方法与应用,本发明的AAV/BCMA是在发明人已经成功构建的腺相关病毒载体的骨架中插入BCMA抗原基因得到野生型重组腺相关病毒载体,再通过点突变得到重组腺相关病毒载体。本发明的重组腺相关病毒载体及其衍生产品可用来制备细胞药物,治疗多发性骨髓瘤。
- 一种携带Survivin抗原基因的重组腺相关病毒载体及其构建方法与应用-201510336279.5
- 刘勇;董文娟;高洪吉;史鹏燕 - 深圳益世康宁生物科技有限公司;刘勇
- 2015-06-17 - 2018-10-02 - C12N15/864
- 本发明公开了一种携带生存素(Survivin,又称存活素)抗原基因的重组腺相关病毒载体及其构建方法与其应用。该rAAV载体是将腺相关病毒载体中的腺相关病毒的结构基因替换为Survivin抗原基因得到。本发明的rAAV的病毒载体可将其携带的Survivin抗原基因输送入单核细胞‑树突状细胞系中,被用于刺激免疫系统的效应细胞。实验证明,被本发明的rAAV的病毒载体感染的DC所诱导的CTL在体外或患者体内可有效地抑制Survivin抗原阳性的恶性肿瘤细胞的生长或者杀灭肿瘤细胞。本发明的重组腺相关病毒载体或其相关产品可被用于制备治疗多种Survivin抗原阳性肿瘤的药物。
- 携带MUC-1抗原基因的重组腺相关病毒载体及构建方法与应用-201510336709.3
- 刘勇;李帆;董文娟;冯雪 - 深圳益世康宁生物科技有限公司;刘勇
- 2015-06-17 - 2018-10-02 - C12N15/864
- 本发明公开了一种携带MUC‑1抗原基因的重组腺相关病毒载体及构建方法与应用。该rAAV是将腺相关病毒载体中在已经被删除的腺相关病毒结构基因位置处插入MUC‑1抗原基因得到。本发明的rAAV可将其携带的MUC‑1抗原基因输送入单核细胞‑树突状细胞系中,被用于刺激免疫系统的效应细胞。实验证明,被本发明的rAAV的病毒载体感染的DC所诱导的CTL在体外或患者体内可有效地抑制MUC‑1抗原阳性的恶性肿瘤细胞的生长或者杀灭肿瘤细胞。本发明的重组腺相关病毒载体或其相关产品可被用于制备治疗多种MUC‑1抗原阳性肿瘤的药物。
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