本发明涉及治疗Leber先天性黑蒙症的载体及其应用。具体地，本发明对RPE65基因编码序列进行了针对性特殊优化设计，从而获得了一种特别适合在哺乳动物(如人)细胞(尤其是感光细胞)中高效表达RPE65蛋白的核苷酸序列，并构建了一种表达正常人源RPE65蛋白的重组AAV病毒，并在RPE65敲除小鼠模型中证明其有效性。相对于未优化的编码序列，经过特殊优化后的RPE65编码序列(SEQ ID NO.:1)的表达量显著提高，非常适合在哺乳动物(尤其是人)细胞内表达，能有效治疗Leber先天性黑蒙症等眼部疾病。
本发明提供了一种试剂，所述试剂包括基因编辑器和gRNA，所述gRNA特异性结合RS1基因，优选地所述gRNA的靶向位点序列sgRNA1和/或sgRNA2，所述sgRNA1如SEQ ID NO:1所示，所述sgRNA2如SEQ ID NO:2所示。本发明还提供了一种利用本发明所述的试剂制备的分离细胞和非人哺乳动物及其制备方面。本发明提供了优化的造模方案，一方面模型得率高，整体胚胎的质量好，并且具有敲除率高、无外源基因片段导入的优点，另一方面小鼠模型视网膜多层变薄劈裂、病理表现更严重，并且与人的视网膜劈裂症表型更类似，是一种不引入外源基因的而有效的X连锁视网膜劈裂症模型非人哺乳动物模型。
本发明属于生物技术领域，具体涉及一种基于5型腺病毒序列的重组质粒及应用。本发明的重组质粒，在常用的pHelper(11K)质粒的基础上，进行了序列优化，以Adv5代替Adv2，在HEK293细胞中通过与pRC与pAAV‑GOI(gene of interest，携带目标基因序列的重组质粒)质粒共同转染，相较于常用的pHelper质粒，将病毒的包装量提高了5倍以上。该质粒不仅可以应用于科学研究，也可以应用于规模化腺相关病毒制备，提高了腺相关病毒的生产效率。
本发明涉及治疗视网膜色素变性疾病的基因治疗载体。具体地，对PROM1基因编码序列进行了针对性特殊优化设计，从而获得了一种特别适合在哺乳动物(如人)细胞(尤其是感光细胞)中高效表达PROM1蛋白的核苷酸序列，并构建了一种表达正常人源PROM1蛋白的重组AAV病毒，并在PROM1敲除小鼠模型中证明其有效性。实验结果表明，相对于未优化的编码序列，经过特殊优化后的PROM1编码序列(SEQ ID NO.:1)的表达量显著提高了3倍以上，非常适合在哺乳动物(尤其是人)细胞内表达，能有效治疗视网膜色素变性疾病等眼部疾病。
本发明提供了一种X连锁遗传性视网膜劈裂症的基因治疗方案与应用。具体地，本发明对RS1基因编码序列进行了针对性特殊优化设计，从而获得了一种特别适合在哺乳动物(如人)细胞(如感光细胞、视神经细胞)中高效表达RS1蛋白的核苷酸序列，并构建了一种表达正常人源RS1蛋白的重组AAV病毒。相对于未优化的编码序列，经过特殊优化后的RS1编码序列(SEQ ID NO.:1)的表达量显著提高，非常适合在哺乳动物(尤其是人)细胞内表达，能有效治疗X连锁青少年视网膜劈裂症。
本发明涉及一种基因治疗载体，包含显性抑制型(dominant negative)人类sterile apha and TIR motif‑containing 1(dnSARM1)、启动子、增加基因表达的β‑globin内含子、human growth hormone poly(A)tail序列等。本发明还涉及包含上述基因治疗载体的药物及组合。其优点表现在：本发明的基因治疗载体可用于治疗或预防由青光眼引起的视网膜神经节细胞病变。
本发明涉及一种基因载体及其用于治疗视网膜神经节细胞变性的基因治疗药物，所述基因载体包含显性抑制型(dominant negative)人类Fas‑associatedprotein with death domain(FADD‑DN)、增强子/启动子、增加基因表达的β‑globin内含子、human growth hormone poly(A)tail序列等。本发明还涉及上述基因载体或包含上述基因载体的组合物在制备治疗视网膜神经节细胞变性的药物中的应用。其优点表现在：本发明的基因治疗载体可用于治疗或预防由青光眼等引起的视网膜神经节细胞病变。
