[发明专利]一种用SLFN13从总RNA中纯化总mRNA的方法有效
| 申请号： | 201810181007.6 | 申请日： | 2018-03-06 |
| 公开（公告）号： | CN108486098B | 公开（公告）日： | 2021-07-06 |
| 发明（设计）人： | 高嵩;杨金玉;谢伟;邓翔宇 | 申请（专利权）人： | 中山大学肿瘤防治中心（中山大学附属肿瘤医院;中山大学肿瘤研究所） |
| 主分类号： | C12N15/10 | 分类号： | C12N15/10;C12Q1/6806 |
| 代理公司： | 北京科家知识产权代理事务所(普通合伙) 11427 | 代理人： | 陈娟 |
| 地址： | 510000 广东*** | 国省代码： | 广东;44 |
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| 摘要： | 本发明公开了一种用SLFN13从总RNA中纯化总MRNA的方法，属于生物技术领域。本发明所述的用SLFN13从总RNA中纯化总mRNA的方法，具体步骤如下：（1）总RNA提取；（2）利用SLFN13对总RNA中的tRNA与rRNA进行酶切；（3）酶切结束后可以直接于70℃加热15分钟将酶灭活，获得纯化的总mRNA。本发明打破传统的RNA纯化观念，引入特异性的RNA内切酶将计划去除的tRNA与rRNA从总RNA中酶切去除，简便高效。具有以下优点：成本低，易获得；操作简便；节约时间；纯化效果好；利于保证mRNA的稳定性。 | ||
| 搜索关键词： | 一种 slfn13 rna 纯化 mrna 方法 | ||
【主权项】：
1.一种用SLFN13从总RNA中纯化总mRNA的方法，其特征在于：具体步骤如下：（1）总RNA提取：利用传统的TRIzol‑氯仿方法从样品中提取完整的总RNA；（2）tRNA与rRNA的酶切：以纯化10ug总RNA为例，取10ul浓度为1ug/ul的总RNA，加入1ul 50uM的SLFN13，加2ul 10X酶切缓冲液，加7ul ddH2O配成20ul的酶切体系；10X酶切缓冲液的成分为：400mM Tris‑HCl（pH 8.0）, 200mM KCl, 40mM MgCl2和20mM DTT；室温孵育酶切30min即可；（3）酶切结束后可以于70℃加热15分钟将SLFN13‑N失活，获得纯化的总mRNA。
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