[发明专利]检测一个或多个DNA端部的方法及其用途

摘要

本发明涉及检测生物材料中的一个或多个DNA端部的方法，所述方法包括以下步骤I‑III和所述步骤I‑III中的每一者的子步骤a‑h中的至少一者：I.制备所述材料，包括a.将所述生物材料固定和/或透化和/或裂解和/或分离和/或分级和/或固定化，b.提高一个或多个DNA端部的可及性，c.封闭所述生物材料中2‑6型分子的一个或多个非特异性结合位点，II.处理一个或多个DNA端部，包括d.通过以下方式对一个或多个DNA端部进行修饰，进行化学或物理处理，随后藉由催化手段或非催化手段使1型分子与所述一个或多个DNA端部结合；封闭所述生物材料中2‑6型分子的一个或多个非特异性结合位点；III.识别和检测所述一个或多个经修饰的DNA端部：将来自步骤II的所述生物材料与至少两种分子：2型分子和3型分子一起孵育，所述至少两种分子以允许导致滚环扩增(RCA)反应的步骤的方式与所述1型分子结合，g.通过以下方式检测一个或多个DNA端部：i.任选地使合适的4型和/或5型分子与所述2型和3型分子接触，其中所述4型和/或5型分子与所述1型寡核苷酸缀合，ii.加入2型寡核苷酸和连接酶，以允许所述加入的2型寡核苷酸与已经与所述4型和/或5型分子连接的所述1型寡核苷酸杂交，或如果所述2型和3型分子与所述1型寡核苷酸连接的话，则与所述2型和3型分子杂交，以及然后执行所述2型寡核苷酸的DNA连接，iii.通过以下方式来执行扩增：加入聚合酶和核苷酸溶液以允许进行滚环扩增(RCA)反应，以及加入6型分子以允许所述6型分子与由此获得的RCA反应产物进行后续杂交，h.检测所述6型分子；其中当执行步骤I的多于一个子步骤a‑c时，它们可以以任何次序发生。本发明还涉及滚环复制用于标识单个DNA端部的存在和位置的用途，以及上述方法用于检测生物材料中的一个或多个DNA端部的用途。