[发明专利]用于使用多个引导RNA来破坏免疫耐受性的方法有效
| 申请号： | 201780044071.3 | 申请日： | 2017-05-19 |
| 公开（公告）号： | CN109475109B | 公开（公告）日： | 2021-10-29 |
| 发明（设计）人： | 维拉·沃罗宁那;林恩·麦克唐纳;马林·普里塞特;卡曼·维纳斯·莱;阿肖克·巴迪斯;安德鲁·J.·莫菲;古斯塔沃·德罗格特;大卫·佛伦杜威;布莱恩·扎姆布罗维兹 | 申请（专利权）人： | 瑞泽恩制药公司 |
| 主分类号： | C07K16/18 | 分类号： | C07K16/18;C12N15/90;C12N15/85;C07K16/00;A01K67/027 |
| 代理公司： | 广州三环专利商标代理有限公司 44202 | 代理人： | 郝传鑫 |
| 地址： | 美国纽约*** | 国省代码： | 暂无信息 |
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| 摘要： | 提供用于制备对目标外来抗原的耐受性降低的非人动物以及使用所述动物来制备针对所述目标外来抗原的抗原结合蛋白的方法和组合物。所述方法和组合物采用使用多个引导RNA的CRISPR/Cas9系统来使与目标外来抗原同源或共有目标表位的自身抗原的表达降低或消除，或使所述自身抗原上的与目标外来抗原共有的表位的表达降低或消除。 | ||
| 搜索关键词： | 用于 使用 引导 rna 破坏 免疫 耐受 方法 | ||
【主权项】：
1.一种产生针对目标外来抗原的抗原结合蛋白的方法，其包括：(a)制备对目标外来抗原的耐受性降低的经遗传修饰的非人动物，其包括：(i)向非人动物单细胞期胚胎或不是单细胞期胚胎的非人动物多能细胞中引入：(I)Cas9蛋白；(II)杂交至靶基因组基因座内的第一引导RNA识别序列的第一引导RNA，其中所述靶基因组基因座包含编码与所述目标外来抗原同源或共有目标表位的自身抗原的基因的全部或一部分；和(III)杂交至所述靶基因组基因座内的第二引导RNA识别序列的第二引导RNA；其中在一对相应第一染色体和第二染色体中所述靶基因组基因座被修饰以产生具有双等位基因修饰的经修饰非人动物单细胞期胚胎或经修饰非人动物多能细胞，其中所述自身抗原的表达被消除；和(ii)从所述经修饰非人动物单细胞期胚胎或所述经修饰非人动物多能细胞产生经遗传修饰的F0代非人动物，其中在所述经遗传修饰的F0代非人动物中的所述一对相应第一染色体和第二染色体中所述靶基因组基因座被修饰以使所述自身抗原的表达被消除；(b)用所述目标外来抗原使在步骤(a)中产生的所述经遗传修饰的F0代非人动物免疫；和(c)在足以引发对所述目标外来抗原的免疫应答的条件下维持所述经遗传修饰的F0代非人动物，其中所述经遗传修饰的F0代非人动物产生针对所述目标外来抗原的抗原结合蛋白。
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