[发明专利]提取鱼类肌肉组织基因组DNA的方法在审
| 申请号： | 201711446034.3 | 申请日： | 2017-12-27 |
| 公开（公告）号： | CN108048452A | 公开（公告）日： | 2018-05-18 |
| 发明（设计）人： | 郑洪坤;郑建坡;刘东源;刘慧 | 申请（专利权）人： | 北京百迈客生物科技有限公司 |
| 主分类号： | C12N15/10 | 分类号： | C12N15/10 |
| 代理公司： | 北京路浩知识产权代理有限公司 11002 | 代理人： | 王文君;姚自奇 |
| 地址： | 101300 北京市顺义区南*** | 国省代码： | 北京;11 |
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| 摘要： | 本发明涉及一种提取鱼类肌肉组织基因组DNA的方法。所述方法将一定量的鱼类肌肉组织在研钵中利用液氮研磨成粗粉，加入一定量的核提取液来提取细胞核，随后离心将大部分杂质与细胞核分离，并用percoll细胞分离混合溶液进一步进行核层分离，并最终将细胞核包埋于低熔点琼脂糖凝胶中，最后在胶块中进行蛋白、RNA等物质的去除。 | ||
| 搜索关键词： | 提取 鱼类 肌肉 组织 基因组 dna 方法 | ||
【主权项】：
1.一种提取鱼类肌肉组织基因组DNA的方法，其特征在于，包括以下步骤：(一)将鱼类肌肉组织在液氮预冷的研钵中研磨成粗粉，加入核提取液进行核提取，用孔径为80-100μm的过滤网过滤核提取液，将滤液在2-4℃离心机中，600g-650g离心10-15min，弃掉上清，收集沉淀；(二)用核提取液重悬步骤(一)获得的沉淀，再用孔径为20-40μm的过滤网过滤重悬液，滤液部分在2-4℃离心机中，50g-60g离心1-2min，收集上清，再将上清液在2-4℃离心机中，600g-650g离心10-15min，弃掉上清，用核提取液重悬沉淀，最后将重悬液加到percoll细胞分离混合溶液上方，2-4℃离心机中，600g-650g离心30-50min后将中间层及中间层下方1-2mL液体吸出获得核液；(三)用核提取液和0.5-1xPBS溶液重悬步骤(二)所得核液后，离心去除percoll细胞分离混合溶液并收集沉淀，将沉淀用CSB溶液重悬并在43-45℃水浴3.5-4.5min后与琼脂糖液混匀制胶块；其中，所述percoll细胞分离混合溶液的组成成分包括20-30％(体积)的核提取液和70-80％(体积)的percoll细胞分离液。
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