[发明专利]一种环境化学物心肌发育毒性评价技术方法

摘要

本发明属于环境化学物毒性评价技术领域，具体提供一种基于转录组测序技术分析环境化学物对人胚胎干细胞定向诱导分化成心肌细胞毒性的评价技术方法。本发明提供的人胚胎干细胞定向诱导分化成心肌细胞的方案，可以用于进行环境接触剂量或人群内暴露剂量下的环境化学物的心肌发育毒性筛查，通过本发明优化的人胚胎干细胞定向心肌细胞分化模型，可以构建环境化学物暴露致胚胎心肌发育毒性的风险评估体系，在环境化学物、药物等心肌毒性预测评估上得以推广应用，为CHD的早期预防提供理论依据，为促进儿童健康、提高人口质量做出贡献。且本发明所采用的转录组测序，可以从全基因组水平，明确环境化学物暴露所导致的胚胎心肌发育毒性。

主权项

1.一种环境化学物对胚胎心肌发育毒性的评价技术方法，其特征在于，包括如下步骤：(1)在GSK抑制剂、Wnt抑制剂的作用下优化人胚胎干细胞定向诱导分化成心肌细胞；(2)在干细胞向心肌细胞诱导分化的全程中，接受低剂量的环境化学物暴露；(3)在环境化学物暴露中，采集细胞照片和心肌细胞搏动视频，通过比较对照组和环境化学物处理组的荧光值和搏动速率来分析环境化学物处理对心肌分化效率的影响；(4)收集经过纯化后的对照组和处理组的心肌细胞，提取RNA，利用RNA-seq检测转录组表达水平，比较环境化学物处理组和对照组的基因表达差异；(5)采用荧光定量PCR检测筛选出的关键心肌特异性差异基因的表达水平，验证环境化学物对心肌细胞分化的影响。