[发明专利]一种增加CHO细胞群蛋白表达量的方法有效
| 申请号： | 201711247666.7 | 申请日： | 2017-11-22 |
| 公开（公告）号： | CN107904257B | 公开（公告）日： | 2021-05-04 |
| 发明（设计）人： | 李鹃;张峥;蔡洁行;周伟昌;陈智胜 | 申请（专利权）人： | 上海药明生物技术有限公司;无锡药明生物技术股份有限公司 |
| 主分类号： | C12N15/85 | 分类号： | C12N15/85;C12N5/10 |
| 代理公司： | 上海专利商标事务所有限公司 31100 | 代理人： | 钱文宇 |
| 地址： | 200131 上海*** | 国省代码： | 上海;31 |
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| 摘要： | 本发明公开一种增加CHO细胞群蛋白表达量的方法，其利用shRNA技术控制乳酸代谢通路上关键酶的转录，具体步骤包括：1)构建含有待表达蛋白序列的质粒和含有表达乳酸代谢通路上关键酶的shRNA的质粒；2)将步骤1)中构建的质粒通过转染的方法引入CHO细胞中；3)对步骤2)中转染后细胞进行抗生素筛选；4)待细胞状态恢复后，采用步骤3)筛选后的细胞生产目标蛋白；所述表达乳酸代谢通路上关键酶包括乳酸脱氢酶、丙酮酸脱氢酶激酶。本发明所提供的方法与传统CHO细胞群生产中需要对pH进行密切监测并不断通过加入碱来调节相比，此发明仅仅在转染时同时额外共同转染数个shRNA质粒，不但操作复杂程度大幅降低，而且对乳酸降低进而最终蛋白产量提高有较大的保障。 | ||
| 搜索关键词： | 一种 增加 cho 细胞 蛋白 表达 方法 | ||
【主权项】：
一种增加CHO细胞群蛋白表达量的方法，其特征在于，利用shRNA技术控制乳酸代谢通路上关键酶的转录，具体步骤包括：1)构建含有待表达蛋白序列的质粒和含有表达乳酸代谢通路上关键酶的shRNA的质粒；2)将步骤1)中构建的质粒通过转染的方法引入CHO细胞中；3)对步骤2)中转染后细胞进行抗生素筛选；4)待细胞状态恢复后，采用步骤3)筛选后的细胞生产目标蛋白；所述表达乳酸代谢通路上关键酶包括乳酸脱氢酶、丙酮酸脱氢酶激酶。
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