本发明公开了一种在线评估层析柱性能的方法及其应用,包括以下步骤:S1、收集在柱层析过程中,任意不同溶液(流动相)发生置换时,层析柱出口传感器变化(上升或下降)的读值(电导率、紫外吸收值等),对该变化过程中的读值进行归一化处理,并拟合相应的正态分布的累积分布函数;S2、基于步骤S1中的累积分布函数,得到柱效评价参数,柱效评价参数包括等板高度HETP和/或非对称性Asymmetry。本发明旨在提供一种新型的基于正态分布和传感器读值转换过程的在线评估层析柱性能的方法(Normal Distribution Transition Analysis,NDTA),替代传统的离线测试方法、提高生产效率,并解决现有TA、DTA、GDTA等方法中存在的计算误差大、指标不稳定、量纲不一致、或无法与传统方法形成有效的桥接等问题。