[发明专利]快速检测DNA聚合酶3′-5′外切活性或错配的方法和试剂盒有效
| 申请号： | 201710947575.8 | 申请日： | 2017-10-12 |
| 公开（公告）号： | CN109652499B | 公开（公告）日： | 2022-06-03 |
| 发明（设计）人： | 王静静;章文蔚;陈奥;徐崇钧;龚梅花;罗银铃;罗宇芬;李长英 | 申请（专利权）人： | 深圳华大智造科技股份有限公司 |
| 主分类号： | C12Q1/6816 | 分类号： | C12Q1/6816;C12Q1/34 |
| 代理公司： | 深圳鼎合诚知识产权代理有限公司 44281 | 代理人： | 孙银行;彭家恩 |
| 地址： | 518083 广东省深圳*** | 国省代码： | 广东;44 |
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| 摘要： | 快速检测DNA聚合酶3'‑5'外切活性或错配的方法和试剂盒。本方法包括：提供一段已知序列的核酸，以及检测引物，其与已知序列的核酸互补配对且3'羟基端的最后一个脱氧核苷酸和待聚合的前两位脱氧核苷酸互不相同；使已知序列的核酸和检测引物杂交，加入待测DNA聚合酶以及带荧光标记的、与待聚合的脱氧核苷酸不同的脱氧核苷酸进行第一次信号收集；加入无外切活性的Taq DNA聚合酶，并且分别加入带荧光标记的第一位待聚合的脱氧核苷酸和带荧光标记的第二位待聚合的脱氧核苷酸，进行第二次信号收集；综合分析第一次信号和第二次信号，判断待测DNA聚合酶是否发生外切或错配。可检测在四种核苷酸单独存在于反应体系时DNA聚合酶3'‑5'外切活性或错配。 | ||
| 搜索关键词： | 快速 检测 dna 聚合 外切 活性 方法 试剂盒 | ||
【主权项】：
1.一种快速检测DNA聚合酶3'‑5'外切活性或错配的方法，其特征在于，包括：提供一段已知序列的核酸，以及针对一种待测脱氧核苷酸的检测引物，该检测引物与所述已知序列的核酸互补配对且3'羟基端的最后一个脱氧核苷酸和待聚合的前两位脱氧核苷酸互不相同；提供两个反应体系，使所述已知序列的核酸和所述检测引物在其内杂交，加入待测的DNA聚合酶以及带荧光标记的、与待聚合的脱氧核苷酸不同的脱氧核苷酸进行反应，然后清洗未被聚合的脱氧核苷酸，进行第一次信号收集；向所述两个反应体系中加入无外切活性的Taq DNA聚合酶，并且分别加入带荧光标记的第一位待聚合的脱氧核苷酸和带荧光标记的第二位待聚合的脱氧核苷酸进行反应，然后清洗未被聚合的脱氧核苷酸，进行第二次信号收集；综合分析所述第一次信号和所述第二次信号，判断所述待测的DNA聚合酶是否发生外切或错配。
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