[发明专利]运用CRISPR/Cas9系统创制粉色果实番茄的基因编辑方法在审
| 申请号： | 201710734041.7 | 申请日： | 2017-08-24 |
| 公开（公告）号： | CN107312795A | 公开（公告）日： | 2017-11-03 |
| 发明（设计）人： | 程远;万红建;周国治;姚祝平;王荣青;阮美颖;李志邈;叶青静;杨悦俭 | 申请（专利权）人： | 浙江省农业科学院 |
| 主分类号： | C12N15/82 | 分类号： | C12N15/82;C12N15/113;A01H5/00;A01H4/00 |
| 代理公司： | 杭州五洲普华专利代理事务所(特殊普通合伙)33260 | 代理人： | 龚玉平 |
| 地址： | 310021 *** | 国省代码： | 浙江;33 |
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| 摘要： | 本发明涉及番茄转基因材料的构建，旨在提供一种运用CRISPR/Cas9系统对番茄SlMYB12基因造成突变，将红色果实番茄转变为粉色果实番茄的基因编辑方法。包括设计SlMYB12基因的gRNA靶位点对应oligo引物，重组连接oligo二聚体和Cas9/gRNA载体。然后转化大肠杆菌感受态细胞，将测序结果正确的质粒转化农杆菌，并介导转化番茄愈伤组织获得转基因植株，获得转基因阳性株系；经基因测序和表型观察确定的纯合突变株系，即为完全丧失SlMYB12功能，果实粉红色的番茄突变体。本发明能有效敲除阻断SlMYB12基因的转录翻译，是成功实现番茄红色果实向粉色果实转变的理想基因编辑体系。 | ||
| 搜索关键词： | 运用 crispr cas9 系统 创制 粉色 果实 番茄 基因 编辑 方法 | ||
【主权项】：
运用CRISPR/Cas9系统敲除番茄SlMYB12的基因编辑方法，其特征在于，包括gRNA靶位点设计在SlMYB12基因的上游5’端第一个外显子上的序列，为：F:5’‑TGGGCATCAAGAGAGGCAGA‑3’，R:5’‑TCTGCCTCTCTTGATGCCCA‑3’；包括gRNA靶位点对应oligo二聚体的合成的序列，oligo序列为：Target‑F：5’‑TTGTGGGCATCAAGAGAGGCAGA‑3’Target‑R：5’‑AACTCTGCCTCTCTTGATGCCCA‑3’。
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