[发明专利]制备环状DNA或RNA的方法有效
| 申请号： | 201710479312.9 | 申请日： | 2017-06-22 |
| 公开（公告）号： | CN107267499B | 公开（公告）日： | 2020-09-04 |
| 发明（设计）人： | 梁兴国;安然;李琦;樊一乔 | 申请（专利权）人： | 中国海洋大学 |
| 主分类号： | C12N15/10 | 分类号： | C12N15/10 |
| 代理公司： | 青岛中天汇智知识产权代理有限公司 37241 | 代理人： | 袁晓玲;郝团代 |
| 地址： | 266000 *** | 国省代码： | 山东;37 |
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| 摘要： | 本发明属于核酸技术领域，具体涉及一种高浓度环状DNA或RNA的制备方法。包括以下步骤：将成环反应所需的辅助模板DNA(下统称splint)、连接酶、连接酶的缓冲液混合配制成初始体系；将单链DNA或者RNA(下统称成环链)和连接酶的缓冲液配制成添加液；每间隔一定时间，向初始体系中添加一定量的含成环链的添加液，每次添加新的成环链后，体系中成环链的浓度增加0.1‑5μM，如此反复数次；最后一次加入含成环链的添加液后，再反应2‑15h；体系中splint与成环链的浓度摩尔比为(1‑10):1。方法简单易操作，不需苛刻的条件，且可以实现超高成环链浓度(≥10μM)下，环状DNA或RNA环的高产率制备。 | ||
| 搜索关键词： | 制备 环状 dna rna 方法 | ||
【主权项】：
一种制备环状DNA或RNA的方法，其特征在于，包括以下步骤：步骤一，将成环反应所需的辅助模板DNA(下统称splint)、连接酶和连接酶反应的缓冲液混合配制成初始体系；将3’或5’端磷酸化修饰的单链DNA或者RNA(下统称成环链)中的一种和上述缓冲液配制成添加液；步骤二，向初始体系中添加一定量的添加液，加入的成环链借助splint形成环状分子，间隔一段时间，待体系中已有的大部分成环链成环后，再次加入添加液，每次添加新的成环链后，体系中成环链的浓度增加0.1‑5μM，如此反复数次；步骤三，最后一次加入含成环链的添加液后，再反应2‑15h；初始体系中splint的摩尔浓度与成环链的摩尔浓度之比为(1‑10):1。
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