[发明专利]热稳定性提高的谷氨酸脱羧酶突变体及其应用有效
| 申请号： | 201710196715.2 | 申请日： | 2017-03-29 |
| 公开（公告）号： | CN106754850B | 公开（公告）日： | 2019-05-17 |
| 发明（设计）人： | 赵黎明;范立强;李明伟;秦臻;陈启明;邱勇隽 | 申请（专利权）人： | 华东理工大学 |
| 主分类号： | C12N9/88 | 分类号： | C12N9/88;C12N15/60;C12P13/00 |
| 代理公司： | 上海科盛知识产权代理有限公司 31225 | 代理人： | 褚明伟 |
| 地址： | 200237 *** | 国省代码： | 上海;31 |
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| 摘要： | 本发明涉及热稳定性提高的谷氨酸脱羧酶突变体及其应用，属于生物工程领域。本发明突变体主要是将谷氨酸脱羧酶氨基酸序列的第5‑7位的谷氨酰胺Q、缬氨酸V和苏氨酸T进行饱和突变，筛选获得高稳定突变体Q5E/V6S/T7V、Q5Y/V6R/T7K、Q5N/V6Y/T7V。本发明获得的谷氨酸脱羧酶突变体的半失活温度为45‑50.5℃，比野生型提高了4.9‑10.2℃；在45℃下的半衰期为76‑129min，比野生型(24min)提高了3.2‑4.3倍。以重组大肠杆菌合成的谷氨酸脱羧酶突变体全细胞转化谷氨酸12h，可得到260‑350g/L的γ‑氨基丁酸(GABA)，摩尔转化率为76.6％‑97.8％。本发明所得到的谷氨酸脱羧酶突变体热稳定性明显提高，更利于γ‑氨基丁酸的生产需求，为高效合成γ‑氨基丁酸奠定了基础。 | ||
| 搜索关键词： | 热稳定性 提高 谷氨酸 脱羧酶 突变体 及其 应用 | ||
【主权项】：
1.一种热稳定性提高的谷氨酸脱羧酶突变体，其特征在于，其由大肠杆菌来源的谷氨酸脱羧酶编码基因进行点饱和突变并筛选得到，所述谷氨酸脱羧酶突变体氨基酸序列相对于天然的谷氨酸脱羧酶氨基酸序列的第5‑7位的谷氨酰胺Q、缬氨酸V和苏氨酸T分别突变为谷氨酸E、丝氨酸S和缬氨酸V；所述谷氨酸脱羧酶突变体氨基酸序列如SEQ ID No.2所示。
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