[发明专利]一种四环素的检测方法及检测试剂盒

摘要

本发明公开了一种四环素的检测方法及检测试剂盒。以四环素的核酸适体为分子识别元件，设计非茎环结构核酸，当体系中存在四环素时，可启动DNA自组装，实现检测信号的扩增，置换出大量富含G碱基的核酸序列。最后形成的G四聚体具有类似辣根过氧化物酶催化活性，可催化氧化TMB‑H₂O₂检测体系，使无色底物变成蓝色，四环素浓度与蓝色变化成正相关，从而可以判断检测体系中四环素浓度。本发明具有较高的灵敏度，对四环素的检测限为10 pM，检测具有很好的特异性，常见干扰物对检测不产生影响。检测过程无需检测仪器，结果直接肉眼可见，具有操作简单，成本低廉，响应迅速等优点，该检测方法和检测试剂盒适于在基层广泛推广。

主权项

1.一种四环素的检测试剂盒，包括显色缓冲液体系、氯高铁血红素、DNA杂交缓冲液，其特征在于：所述检测试剂盒还包括下列核酸序列：序列A：为四环素的核酸适体，其核苷酸序列为5'‑CGTACGGAATTCGCTAGCCCCCCGGCAGGCCACGGCTTGGGTTGGTCCCACTGCGCGTGGATCCGAGCTCCACGTG‑3'；序列B：具有4区域和5区域；序列B与A部分互补，形成A‑B双链；当有四环素存在时，A与四环素相互作用，B被置换下来；置换下来的B用于启动后续DNA自组装放大检测信号；序列C：是富含G碱基的核酸序列，加入氯高铁血红素后，会形成具有催化活性的G四聚体结构，C具有1区域和2区域；序列D：具有6区域、3区域和4区域；序列E：具有2*区域、3*区域、4*区域和5*区域；序列F：具有2区域、3区域和4区域；序列B:5'‑GATCCACGCGCAGTGG‑GACCAA‑3'；序列C:5'‑GGGTA‑GGGCGGGTTGGG‑3'；序列D:5'‑CCACATACATCATATT‑CCCT‑GATCCACGCGCAGTGG‑3'；序列E:5'‑TTGGTC‑CCACTGCGCGTGGATC‑AGGG‑CCCAACCCGCCC‑3'；序列F:5'‑GGGCGGGTTGGG‑CCCT‑GATCCACGCGCAGTGG‑3'。