[发明专利]一种四环素的检测方法及检测试剂盒

说明书

本发明公开了一种四环素的检测方法及检测试剂盒。以四环素的核酸适体为分子识别元件，设计非茎环结构核酸，当体系中存在四环素时，可启动DNA自组装，实现检测信号的扩增，置换出大量富含G碱基的核酸序列。最后形成的G四聚体具有类似辣根过氧化物酶催化活性，可催化氧化TMB‑H₂O₂检测体系，使无色底物变成蓝色，四环素浓度与蓝色变化成正相关，从而可以判断检测体系中四环素浓度。本发明具有较高的灵敏度，对四环素的检测限为10 pM，检测具有很好的特异性，常见干扰物对检测不产生影响。检测过程无需检测仪器，结果直接肉眼可见，具有操作简单，成本低廉，响应迅速等优点，该检测方法和检测试剂盒适于在基层广泛推广。

技术领域

本发明属于分析化学领域，具体涉及一种四环素的检测方法及检测试剂盒。

背景技术

四环素（Tetracycline）属于广谱抗生素，常用于防止禽畜病害，促进幼年禽畜生长等。长期食用含有四环素的食品将对人体健康造成极大危害，引起骨骼畸形和生长抑制，干扰人体的正常生理机能，影响儿童和青少年的生长发育，降低人体对致病菌的抵抗能力，并可造成肝肾损害，引起前庭反应、过敏反应、变态反应、耐药性等。

目前，四环素残留检测主要采用微生物法、质谱色谱法和酶联免疫分析法。但微生物分析法常常出现假阳性结果，干扰检测判断；质谱色谱法通常需要对样品进行复杂的前处理，涉及昂贵的检测仪器，操作繁琐，测试时间长、费用高；传统的酶联免疫法虽然简便、快速，但灵敏度差，难以满足痕量检测的需求。

为解决上述问题，本发明以四环素的核酸适体为分子识别元件，结合DNA自组装信号扩增，实现超灵敏检测，同时结合G-四聚体显色原理，实现检测过程无需检测仪器，大大简化了操作，提高了灵敏度与便捷性，适于现场快速分析检测四环素污染情况。

发明内容

为解决现有技术的不足，本发明旨在利用非茎环结构DNA自组装实现检测信号循环放大，达到超灵敏检测四环素的目的，并研制相关的检测试剂盒。

本发明所采取的技术方案是：

一种四环素的检测试剂盒，包括显色缓冲液体系、氯高铁血红素、DNA杂交缓冲液；所述检测试剂盒还包括下列核酸序列：

序列A：为四环素的核酸适体，其核苷酸序列为5'-CGTACGGAATTCGCTAGCCCCCCGGCAGGCCACGGCTTGGGTTGGTCCCACTGCGCGTGGATCCGAGCTCCACGTG-3'（SEQ ID NO：1）；

序列B：具有4区域和5区域；序列B与A部分互补，形成A-B双链；当有四环素存在时，A与四环素相互作用，B被置换下来；置换下来的B用于启动后续DNA自组装放大检测信号；

序列C：是富含G碱基的核酸序列，加入氯高铁血红素后，会形成具有催化活性的G四聚体结构，C具有1区域和2区域；

序列D：具有6区域、3区域和4区域；

序列E：具有2*区域、3*区域、4*区域和5*区域；

序列F：具有2区域、3区域和4区域；

其中上述的1、2、3、4、5区域分别与1*、2*、3*、4*、5*区域序列互补配对。

优选的，序列B的碱基数为18-26个，更优选为23个，碱基数过长可能导致难以置换B，过短可能导致背景值过高。

优选的，1区域的碱基数为3-7个。

优选的，2区域的碱基数为10-16个。

优选的，3区域的碱基数为3-5个，4区域的碱基数12-18个，5区域的碱基数为4-10个。