[发明专利]一种四环素的检测方法及检测试剂盒

权利要求书

1.一种四环素的检测试剂盒，包括显色缓冲液体系、氯高铁血红素、DNA杂交缓冲液，其特征在于：所述检测试剂盒还包括下列核酸序列：

序列A：为四环素的核酸适体，其核苷酸序列为5'-CGTACGGAATTCGCTAGCCCCCCGGCAGGCCACGGCTTGGGTTGGTCCCACTGCGCGTGGATCCGAGCTCCACGTG-3'；

序列B：具有4区域和5区域；序列B与A部分互补，形成A-B双链；当有四环素存在时，A与四环素相互作用，B被置换下来；置换下来的B用于启动后续DNA自组装放大检测信号；

序列C：是富含G碱基的核酸序列，加入氯高铁血红素后，会形成具有催化活性的G四聚体结构，C具有1区域和2区域；

序列D：具有6区域、3区域和4区域；

序列E：具有2*区域、3*区域、4*区域和5*区域；

序列F：具有2区域、3区域和4区域；

序列B:5'-GATCCACGCGCAGTGG-GACCAA-3'；

序列C:5'-GGGTA-GGGCGGGTTGGG-3'；

序列D:5'-CCACATACATCATATT-CCCT-GATCCACGCGCAGTGG-3'；

序列E:5'-TTGGTC-CCACTGCGCGTGGATC-AGGG-CCCAACCCGCCC-3'；

序列F:5'-GGGCGGGTTGGG-CCCT-GATCCACGCGCAGTGG-3'。

2.根据权利要求1所述的检测试剂盒，其特征在于：序列C、D和E混合后，序列C的2区域与E的2*区域互补，D的3和4区域与E的3*和4*区域互补，形成C-D-E混合物。

3.根据权利要求1所述的检测试剂盒，其特征在于：显色缓冲液体系由显色缓冲液、底物以及双氧水构成，包括四甲基联苯胺-双氧水缓冲液体系、邻苯二胺-双氧水缓冲液体系或2,2-联氮-二(3-乙基-苯并噻唑-6-磺酸)二铵盐-双氧水缓冲液体系。

4.根据权利要求1所述的检测试剂盒，其特征在于：DNA杂交缓冲液为Tris-HCl缓冲液，含有150mM NaCl以及50mM KCl。

5.一种四环素的检测方法，其特征在于：包括下列步骤：

1)先用DNA杂交缓冲液分别溶解核酸序列A、B、C、D、E、F；将500nM的A与500nM的B混合，室温反应30分钟，形成A-B混合物；加入待检测物，室温反应45分钟，完成置换反应；

2)将浓度分别为500nM的C、D、E充分混匀，室温反应30分钟，形成C-D-E混合物；将步骤1)的溶液加入C-D-E混合物中，充分混匀，室温反应50分钟，完成置换反应；随后加入500nM的F，充分混匀，室温反应50分钟，完成置换反应；

3)向步骤2)的溶液加入0.3M的氯高铁血红素，室温反应30分钟；取出50L反应液，加入到950L显色缓冲液体系中，室温反应15分钟，观察颜色变化；如果待测溶液中有四环素时，溶液变色，当没有四环素时，溶液无色；

其中，核酸序列A、B、C、D、E、F，DNA杂交缓冲液，显色缓冲液体系如权利要求1～4任一项所述。