[发明专利]一种骨髓蛋白质的制备方法及其应用

摘要

本发明涉及一种骨髓蛋白质的制备方法及其应用，该方法中的原料为牛、羊、马、骆驼或其它动物屠宰场的动物骨骼里面的新鲜骨髓，采用水清洗前处理之后的新鲜骨髓中的蛋白质分别利用三羟甲基氨基甲烷盐酸缓冲溶液和氯化钠溶液提取，其中的脂质成分由石油醚或正己烷萃取其没有脂质成分残留，其后水提取物部分浓缩、透析脱盐、再利用现代喷雾干燥技术或冷冻干燥精制而成的骨髓蛋白质。该骨髓蛋白质被验证其抗细菌和真菌活性，具有广泛的抗微生物活性，同时具有增强体液免疫及全身免疫的功能，富含人体易消化和吸收的纯天然来源蛋白质。既保留了骨髓蛋白质营养的同时还实现变废为宝和资源充分利用的目的；该骨髓蛋白质作为天然抗菌剂、食品添剂或药物，可用于食品和医药行业。

主权项

一种骨髓蛋白质的制备方法，其特征在于该方法中的原料为动物屠宰后骨骼中的骨髓，采用缓冲液或无机盐溶剂提取，具体操作按下列步骤进行：缓冲液提取：a、取新鲜骨髓，清洗3次，去掉骨头和血迹，切成小块，按重量比为1∶5加入液氮粉碎，反复粉碎3‑4次，得到骨髓粉碎粉，低温冰箱保存备用；b、将步骤a中得到骨髓粉碎粉100g，加入重量比为1:10的三羟甲基氨基甲烷盐酸缓冲溶液0.1mol/L，pH=8.4，在温度40℃条件下置集约式恒温加热磁力搅拌机上回流反复提取2‑3次至未见沉淀物为止，得到总提取液；c、将步骤b得到的总提取按料液比为1:6的石油醚或正己烷脱脂，反复2‑3次，收集下层提取液；d、将步骤c得到的下层提取液在12000转/分，温度4℃离心10min，取上清液，得到骨髓蛋白质粗提液；e、将步骤d中得到的蛋白质肽粗提液，浓缩至2‑5倍，并利用1000Da透析带在蒸馏水循环透析24‑48小时；f、将步骤e中透析后的蛋白质提取液，用硫酸铵饱和溶液沉淀，先用浓度为30%饱和硫酸铵沉淀，再依次用浓度为60%‑90%饱和硫酸铵沉淀，温度4℃，过夜，离心，透析48h，喷雾干燥或冷冻干燥，即得到1.14g骨髓蛋白质；无机盐溶剂提取：a、取新鲜骨髓，清洗3次，去掉骨头和血迹，切成小块，按重量比为1∶5加入液氮粉碎，反复粉碎3‑4次，得到骨髓粉碎粉，低温冰箱保存备用；b、取步骤a中3等份100g的已粉碎好骨髓样品，每份样品中按料液比为1:5，分别加入质量分数为0.5%、2.5%和5%的氯化钠溶液提取，在温度40℃下置集约式恒温加热磁力搅拌机上回流反复提取2‑3次至未平底下未见沉淀物为止，回流时间为3‑4h，将提取液过滤，未过滤部分再加氯化钠溶液提取，过滤，合并滤液；c、将步骤b得到的合并滤液用料液比为1:4石油醚或正己烷脱脂，反复2‑3次，收集下层提取液；d、将步骤c中下层液体12000转/分下，温度4℃，离心10min，取上清液，得到骨髓多蛋白质提取液；e、将步骤d中得到的蛋白质粗提取液，浓缩至5/10‑2/10倍，并利用1000Da透析带在蒸馏水循环透析48‑72小时，冷冻干燥，得到骨髓蛋白质，分别为0.5%氯化钠1.1g、2.5% 氯化钠0.925g和5% 氯化钠0.52g。