[发明专利]CHO细胞表达牛传染性病气管炎病毒gD蛋白及其亚单位疫苗的制备和应用

摘要

本发明公开了一种CHO细胞表达的重组牛传染性鼻气管炎病毒gD蛋白及亚单位疫苗的制备方法和应用，并证明该疫苗能够在牛体内产生较强的体液免疫，属于动物疫苗与兽用生物制品技术领域，其目的在于提供一种可大规模工业化生产牛传染性鼻气管炎病毒重组亚单位疫苗的制备方法，所述重组亚单位疫苗制备方法包括以下步骤1)克隆包含gD蛋白编码基因的真核表达载体；2)转染CHO细胞，通过选择、筛选和驯化的方式得到悬浮稳定高效表达gD蛋白的CHO细胞株；3)发酵培养2)中所述的细胞株，纯化后得到重组gD蛋白；4)将重组gD蛋白与ISA 201 VG充分混匀得到重组亚单位疫苗。本发明提供的方法能够从细胞培养上清中收获目的蛋白，且产量高达2‑3g/L，不仅缩短蛋白纯化时间和简化疫苗生产步骤，也大大降低疫苗生产成本。

主权项

一种重组牛传染性鼻气管炎病毒gD蛋白的制备方法，其特征在于，所述制备方法包括以下步骤：1)将牛传染性鼻气管炎病毒gD蛋白基因克隆到真核表达载体中得到含有牛传染性鼻气管炎病毒gD蛋白编码基因的重组质粒；2)再将含有牛传染性鼻气管炎病毒gD蛋白编码基因的重组质粒转染至CHO细胞中；3)通过培养、筛选、驯化2)中所述CHO细胞株得到高度表达的细胞株；4)发酵培养3)中所述细胞株，纯化后得到重组牛传染性鼻气管炎病毒gD蛋白。