[发明专利]一种测定大豆肽蛋白质粉中β-羟基-β-甲基丁酸含量的方法

摘要

本发明公开了一种测定大豆肽蛋白质粉中β‑羟基‑β‑甲基丁酸含量的方法，包括：（1）样品溶液的制备：取样品加入0.1mol/L的盐酸溶液，溶解后以乙腈稀释至刻度，振摇，滤过，精密吸取续滤液以0.1mol/L的盐酸溶液稀释至刻度，摇匀，作为样品溶液；（2）对照品溶液的制备：取β‑羟基‑β‑甲基丁酸钙水合物对照品，加0.1mol/L的盐酸并稀释，制成每ml含β‑羟基‑β‑甲基丁酸为0.1mg、0.3mg、0.5mg、0.7mg、1.0mg的对照品。（3）β‑羟基‑β‑甲基丁酸含量的测定：采用十八烷基硅烷硅胶为填充剂的色谱柱，0.01mol/L庚烷磺酸钠溶液‑乙腈为流动相，洗脱分离目标成分，用线性回归方程计算β‑羟基‑β‑甲基丁酸含量。本方法能准确有效地测定β‑羟基‑β‑甲基丁酸的含量，方法简便，经济实效，重现性好，准确度高。

主权项

1.一种高效液相色谱外标法测定大豆肽蛋白质粉中β‑羟基‑β‑甲基丁酸含量的方法，其特征在于包括如下步骤：（1）样品溶液的制备：取样品0.6g，精密称定，置25ml量瓶中，加入0.1mol/L的盐酸溶液5ml，用力振摇使固体溶解，以乙腈稀释至刻度，振摇1分钟，滤过，精密吸取续滤液2.0ml置5ml量瓶中，以0.1mol/L的盐酸溶液稀释至刻度，摇匀，经0.45μm滤膜滤过，取续滤液，作为样品溶液；（2）对照品溶液的制备：取β‑羟基‑β‑甲基丁酸钙水合物对照品适量，加0.1mol/L的盐酸溶液溶解并稀释，制成每ml含β‑羟基‑β‑甲基丁酸为0.1mg、0.3mg、0.5mg、0.7mg、1.0mg的对照品溶液；（3）β‑羟基‑β‑甲基丁酸含量测定方法：色谱条件：色谱柱为十八烷基硅烷硅胶为填充剂，以0.01mol/L庚烷磺酸钠溶液‑乙腈为流动相，柱温为35℃，流速为0.4~0.6ml/min，样品进样量：5μl，检测波长为214nm；测定法：精密量取对照品溶液1~5各5μl，注入液相色谱仪，按浓度对峰面积绘制标准曲线计算回归方程；另精密量取样品溶液5μl注入液相色谱仪，记录色谱图，用回归方程计算样品中β‑羟基‑β‑甲基丁酸的含量；所述步骤（3）的液相色谱条件中色谱柱为PhenomexUranus C18，5μm，长度：250×4.6mm；所述步骤（3）的液相色谱条件中流动相为0.01mol/L庚烷磺酸钠溶液‑乙腈，两者的体积比为93～97：7～3；所述步骤（3）的液相色谱条件中流动相流速：0.5ml/min；所述步骤（3）的液相色谱条件中，流动相用10%磷酸溶液调节pH值为2.8 ~3.2。