[发明专利]一种测定大豆肽蛋白质粉中β-羟基-β-甲基丁酸含量的方法

说明书

本发明公开了一种测定大豆肽蛋白质粉中β‑羟基‑β‑甲基丁酸含量的方法，包括：（1）样品溶液的制备：取样品加入0.1mol/L的盐酸溶液，溶解后以乙腈稀释至刻度，振摇，滤过，精密吸取续滤液以0.1mol/L的盐酸溶液稀释至刻度，摇匀，作为样品溶液；（2）对照品溶液的制备：取β‑羟基‑β‑甲基丁酸钙水合物对照品，加0.1mol/L的盐酸并稀释，制成每ml含β‑羟基‑β‑甲基丁酸为0.1mg、0.3mg、0.5mg、0.7mg、1.0mg的对照品。（3）β‑羟基‑β‑甲基丁酸含量的测定：采用十八烷基硅烷硅胶为填充剂的色谱柱，0.01mol/L庚烷磺酸钠溶液‑乙腈为流动相，洗脱分离目标成分，用线性回归方程计算β‑羟基‑β‑甲基丁酸含量。本方法能准确有效地测定β‑羟基‑β‑甲基丁酸的含量，方法简便，经济实效，重现性好，准确度高。

技术领域

本发明属于特殊医学用途配方食品、保健食品及药品领域，具体地说，涉及一种高效液相色谱外标法测定大豆肽蛋白质粉中β-羟基-β-甲基丁酸含量的方法。

背景技术

β-羟基-β-甲基丁酸(HMB)是一种五碳有机酸，是必须氨基酸亮氨酸在体内通过其代谢产物α-酮异己酸产生的一种衍生物。大量研究表明HMB具有预防肌肉减少，增加肌肉量的作用，在运动及健美方面得到广泛的应用。而许多疾病，如严重创伤、肿瘤、艾滋病、老年人肌肉萎缩等都会导致肌肉的流失，所以近年来HMB也被应用于临床上对肌肉消耗的治疗。目前，随着对HMB在以上几方面关注度的增多，陆续出现含HMB成分的各种食品或制剂产品，而检测这些产品中β-羟基-β-甲基丁酸(HMB)含量的文献未见有报道，β-羟基-β-甲基丁酸钙为卫生部2011年批准使用的新资源食品，执行企业标准。为了有效控制含HMB成分的产品质量，建立了一种高效液相色谱外标法测定大豆肽蛋白质粉中β-羟基-β-甲基丁酸的含量，该检测方法简便快速、准确可靠，实用性强。

发明内容

本发明的目的是使大豆肽蛋白质粉质量可控，填补国内特殊医学用途配方食品、保健食品及药品行业关于HMB质量检测的空白，提供一种利用高效液相色谱外标法检测大豆肽蛋白质粉中β-羟基-β-甲基丁酸含量的方法。该方法采用高效液相色谱技术，以可耐受95％以上水分的Uranus C₁₈为固定相及0.01mol/L庚烷磺酸钠溶液-乙腈(95:5)(10％磷酸溶液调节pH值为2.8～3.2)为流动相，进行洗脱分离目标成分，紫外检测器检测，并利用乙腈使本产品中的蛋白质变性沉淀除去，消除对HMB的干扰。方法简便快捷，准确可靠，经济实效，为大豆肽蛋白质粉的质量标准制订及制备工艺的筛选提供技术支持和参考。

为实现上述目的，本发明采用如下技术方案：

一种高效液相色谱外标法测定大豆肽蛋白质粉中β-羟基-β-甲基丁酸含量的方法，包括如下步骤：

(1)样品溶液的制备：取样品0.6g，精密称定，置25ml量瓶中，加入0.1mol/L的盐酸溶液5ml，用力振摇使固体溶解，以乙腈稀释至刻度，振摇1分钟，滤过，精密吸取续滤液2.0ml置5ml量瓶中，以0.1mol/L的盐酸溶液稀释至刻度，摇匀，经0.45μm滤膜滤过，取续滤液，作为样品溶液；

(2)对照品溶液的制备：取β-羟基-β-甲基丁酸钙水合物对照品适量，加0.1mol/L的盐酸溶液溶解并稀释，制成每ml含β-羟基-β-甲基丁酸为0.1mg、0.3mg、0.5mg、0.7mg、1.0mg的对照品溶液。

(3)β-羟基-β-甲基丁酸含量的测定：

色谱条件：色谱柱为十八烷基硅烷硅胶为填充剂(耐高比例水)，以0.01mol/L庚烷磺酸钠溶液-乙腈(10％磷酸溶液调节pH值为2.8～3.2)为流动相，柱温为35℃，流速为0.4～0.6ml/min，样品进样量：5μl，检测波长为214nm。