[发明专利]一种鉴定植物蛋白饮料中植物源性成分的方法

摘要

本发明提供一种基于半导体芯片测序技术和数字PCR技术相结合的植物蛋白饮料中植物源性成分分析方法，步骤为1）提取植物蛋白饮料中生物成分的基因组DNA；2）用融合引物对对ITS2片段进行PCR扩增；3）扩增得到的DNA片段用ion torrent平台进行高通量测序；4）利用该平台中自带植物源ITS2条形码数据库分析插件，或将获得的序列应用BLAST方法进行结果鉴定；5）数字PCR验证测序结果并定量分析；6）综合测序比对结果与定量结果，分析计算检品核酸中各物种DNA拷贝数所占比重，将含量比重≥5%的物种列为该样检出的植物源性成分。其高通量、自动化、周期短，为食品安全监管提供有力技术支撑。

主权项

一种基于半导体芯片测序技术和数字PCR技术相结合的植物蛋白饮料中植物源性成分分析方法，其特征在于，包含下列步骤：1) 植物蛋白饮料进行样品前处理；2）核酸提取；3）DNA浓度测定；4）对ITS2片段进行PCR扩增：将测序用的接头和区分样本的条形码序列Barcode加在初始引物对上获得融合引物对，初始引物序列为：F：5′‑ATGCGATACTTGGTGTGAAT‑3′；R：5′‑GACGCTTCTCCAGACTACAAT‑3′；ITS2扩增后得到的扩增子经过纯化、稀释、等体积混合后即可作为上机用的文库；5）将扩增得到的ITS2片段用ion torrent平台进行高通量测序；6）利用ion torrent平台中自带植物源ITS2条形码数据库分析插件，或将获得的序列应用BLAST方法进行结果鉴定；7）有效片段数量统计：利用平台自带分析软件统计有效片段读数，初步判断一份样品中，检出植物物种之间的比重关系；8）数字PCR验证测序结果并定量分析；9）结果报告：综合测序比对结果与定量结果，分析计算检品核酸中各物种DNA拷贝数所占比重，将含量比重≥5%的物种列为该样检出的植物源性成分。