[发明专利]哈蟆油基因组DNA提取方法、试剂盒及其应用有效
| 申请号： | 201610903601.2 | 申请日： | 2016-10-17 |
| 公开（公告）号： | CN106350508B | 公开（公告）日： | 2019-01-18 |
| 发明（设计）人： | 石林春;刘建辉;宋经元;刘金欣;唐先明;刘景波;姚辉;周建国;王福宾;于海龙 | 申请（专利权）人： | 中国医学科学院药用植物研究所;哈尔滨市食品药品检验检测中心 |
| 主分类号： | C12N15/10 | 分类号： | C12N15/10;C12Q1/6806 |
| 代理公司： | 上海精晟知识产权代理有限公司 31253 | 代理人： | 冯子玲 |
| 地址： | 100193 北*** | 国省代码： | 北京;11 |
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| 摘要： | 本发明公开了一种哈蟆油基因组DNA提取方法，包括取哈蟆油药材，加入含酸活性水对样品进行复性，加入缓冲液ATL和蛋白酶K裂解样品；加入脂肪组织去除液酚/氯仿/异戊醇去除脂肪及蛋白；加入洗涤液洗涤，通过吸附柱吸附DNA，最终洗脱获得高纯度基因组DNA。本发明还提供了哈蟆油基因组DNA的提取试剂盒及应用。本发明的提取方法能有效提取哈蟆油药材中基因组DNA，获得高纯度的基因组DNA，为DNA条形码技术得到更为广泛的应用提供了良好的基础。 | ||
| 搜索关键词： | 哈蟆油 基因组 dna 提取 方法 试剂盒 及其 应用 | ||
【主权项】：
1.一种哈蟆油基因组DNA提取方法，其特征在于，所述方法包括以下步骤：1)取哈蟆油药材，加入缓冲液FB，研磨至无明显颗粒并混匀，其中，缓冲液FB为含酸活性水，所述含酸活性水为含0.1％～2％盐酸的水；2)加入缓冲液ATL和蛋白酶K，混匀，以裂解样品，其中，缓冲液ATL含1％～2.5％的十二烷基磺酸钠、10～20mM甘氨酸和10mM乙二胺四乙酸钠；3)加入缓冲液AL，混匀，其中，缓冲液AL含10～20mM甘氨酸和10mM乙二胺四乙酸钠；4)加入脂肪组织去除液：酚/氯仿/异戊醇，混匀，离心获得第一上清液；5)在所述第一上清液中加入氯仿/异戊醇，混匀，离心获得第二上清液；6)在所述第二上清液中加入无水乙醇，混匀；7)将上一步所得溶液加入吸附柱中，离心；8)向吸附柱中加入缓冲液AW1，离心，其中，缓冲液AW1含36％～50％盐酸胍和20％～50％异丙醇；9)向吸附柱中加入缓冲液AW2，离心，其中，缓冲液AW2含0.1％～1％叠氮钠和20％～50％异丙醇；10)向吸附柱中加入TE或者ddH2O，离心获得DNA。
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