[发明专利]一种使用环糊精作为籽晶来提高蛋白质结晶成功率的方法在审
| 申请号： | 201610554792.6 | 申请日： | 2016-07-14 |
| 公开（公告）号： | CN106188220A | 公开（公告）日： | 2016-12-07 |
| 发明（设计）人： | 尹大川;张辰艳;杨雪舟;王前进;董晨;郭云珠;闫二开;刘悦 | 申请（专利权）人： | 西北工业大学 |
| 主分类号： | C07K1/30 | 分类号： | C07K1/30;C12N9/92;C12N9/36;C07K14/42;C12N9/56;C12N9/22;C12N9/42 |
| 代理公司： | 西北工业大学专利中心 61204 | 代理人： | 顾潮琪 |
| 地址： | 710072 *** | 国省代码： | 陕西;61 |
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| 摘要： | 本发明提供了一种使用环糊精作为籽晶来提高蛋白质结晶成功率的方法，首先配置蛋白质溶液，然后添加环糊精，建立蛋白质结晶体系，最终在显微镜下观察，统计出现蛋白质晶体的条件数目。本发明通过将环糊精及其衍生物添加在结晶体系中，使得晶体形核几率增加，从而有效地提高了蛋白质结晶成功率。通过本发明，结晶成功率的提高最大可达到现有技术中未添加环糊精的对照组的5倍以上。 | ||
| 搜索关键词： | 一种 使用 环糊精 作为 籽晶 提高 蛋白质 结晶 成功率 方法 | ||
【主权项】：
一种使用环糊精作为籽晶来提高蛋白质结晶成功率的方法，其特征在于包括下述步骤：(a)配置pH值在3～10、浓度范围为0.001～1M的缓冲液，使用缓冲液溶解蛋白质，使蛋白质的终浓度达到1～100mg/ml，得到蛋白质溶液；(b)将环糊精或其衍生物添加到蛋白质溶液中，其中环糊精或其衍生物的终浓度为0.001～5g/mL；或将环糊精及其衍生物中的2～10种添加在蛋白质溶液中，使每种环糊精或其衍生物的终浓度为0.001～5g/mL；得到蛋白质和环糊精的混合溶液；或将环糊精或其衍生物添加在结晶试剂中，其中环糊精或其衍生物的终浓度为0.001～5g/mL，或将环糊精及其衍生物中的2～10种添加在结晶试剂中，其中每种环糊精或其衍生物的终浓度为0.001～5g/mL，得到环糊精和结晶试剂的混合溶液；或将环糊精或其衍生物溶解于水，配成浓度为0.001～5g/mL的溶液滴加在结晶容器中，或将环糊精及其衍生物中的2～10种溶解于水，配成浓度为0.001～5g/mL的溶液滴加在结晶容器中，烘干得到附着有环糊精的结晶容器；(c)将结晶试剂与步骤(b)中得到的蛋白质和环糊精的混合溶液按照(0.01～50)：1的体积比混合，滴加在结晶容器中；或者将步骤(b)中得到的环糊精和结晶试剂的混合溶液与步骤(a)中得到的蛋白质溶液按照(0.01～50)：1的体积比混合，滴加在结晶容器中；或者将结晶试剂与步骤(a)中得到的蛋白质溶液按照(0.01～50)：1的体积比混合，滴加在附着有环糊精的结晶容器中；(d)将结晶容器在0～60℃下静置1～720h结晶；在显微镜下观察，统计出现蛋白质晶体的条件数目。
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