[发明专利]一种提高菊酯类降解酶表达量的方法有效
| 申请号： | 201610531523.8 | 申请日： | 2016-07-07 |
| 公开（公告）号： | CN106191002B | 公开（公告）日： | 2019-11-15 |
| 发明（设计）人： | 龙燕妮 | 申请（专利权）人： | 李芬 |
| 主分类号： | C12N9/18 | 分类号： | C12N9/18;C12N1/21;C12R1/19 |
| 代理公司： | 暂无信息 | 代理人： | 暂无信息 |
| 地址： | 431800湖北省荆门市*** | 国省代码： | 湖北;42 |
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| 摘要： | 本发明提供一种提高菊酯类降解酶表达量的方法。即通过制备生产菌种大肠杆菌E.coli BLR(DE3)/pET‑28a‑est825；种子培养；发酵培养：使用乳糖和异丙基硫代半乳糖(IPTG)的混合诱导溶液(摩尔浓度比为7:3)降温至30‑35℃开始诱导，诱导过程中继续流加甘油和酵母粉的混合补料液，维持发酵液中甘油的浓度为1‑2g/L，诱导的时间持续6‑7h；最后将菌体用含有0.005mol/L苯甲基磺酰氟的pH6.5‑7.0的磷酸盐缓冲液配制成质量浓度15％‑20％的菌悬液，超声破碎离心冻干后即得高酶活降解酶酶粉。 | ||
| 搜索关键词： | 一种 提高 菊酯类 降解 表达 方法 | ||
【主权项】：
1.一种提高菊酯类降解酶表达量的方法，包括以下步骤：/n1)制备生产菌种大肠杆菌E.coli BLR(DE3)/pET-28a-est825；/n2)进行种子培养；/n3)进行发酵培养：当补料发酵培养至菌体的OD600nm值达到120-140时，一次性添加乳糖+异丙基硫代半乳糖(IPTG)的混合诱导溶液，使发酵液中上述混合诱导液的浓度为9-13g/L，所述乳糖与异丙基硫代半乳糖的摩尔浓度比为7:3，温度降至30-35℃开始诱导，诱导过程中继续流加甘油和酵母粉的混合补料液，维持发酵液中甘油的浓度为1-2g/L，诱导的时间持续6-7h；/n4)发酵结束后，在4-8℃的温度下离心收集菌体，将菌体用含有0.005mol/L苯甲基磺酰氟的pH6.5-7.0的磷酸盐缓冲液配制成质量浓度15％-20％的菌悬液，将菌悬液在4-8℃的温度下20KHz超声破碎，破碎液离心制得上清液，冻干即得酶粉。/n
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