[发明专利]一种复合诱变的酸性蛋白酶高产菌株选育方法

摘要

本发明公开了一种复合诱变的酸性蛋白酶高产菌株选育方法，包括以下步骤：a）孢子悬浮液制备：取恒温培养箱内的平板孢子，震荡后用无菌蒸馏水稀释，即得孢子悬浮液并备用；b）复合60Co‑γ与等离子体诱变：制取该菌株的孢子悬浮液，进行等离子体离子束注入，置于剂量0.5～2.0 KGy的辐照台面上，吸取60Co‑γ射线照射后的样品稀释、涂布于0.4%的干酪素培养基上；c）菌株筛选：c1)将干酪素培养基在35℃避光恒温培养2～4 d，挑选其中HC值大于平均值的变异菌株，接入分离培养基斜面保存备用；c2)取步骤c1）得到的菌株，加入1 mL 2%的硫代硫酸钠作为解毒剂，培养基中30℃培养2d，选育出酸性蛋白酶酶活力提高值最大的为高产菌株。

主权项

一种复合诱变的酸性蛋白酶高产菌株选育方法，其特征在于：包括以下步骤：a）孢子悬浮液制备：取恒温培养箱内40℃下培养5 d的平板孢子，用无菌蒸馏水洗脱平板孢子，置于无菌并盛有玻璃珠的三角瓶中，在250～300 r/min的震荡装置上震荡2～5 h，使孢子活化和分散，使孢子分散率在90% 以上，在光学显微镜下观察孢子并计数，然后用无菌蒸馏水稀释孢子悬浮液至115 个/mL，即得孢子悬浮液并备用；b）复合60Co‑γ与等离子体诱变：洗脱麦芽汁琼脂平板培养基上的孢子，制取该菌株个/mL的孢子悬浮液，移液管移取0.2 mL悬液至无菌空平皿，涂匀，以无菌风吹干，计算损耗率；进行等离子体离子束注入，以为注入离子，注入电压为10KV～25KV，注入剂量分别为（15~75）×2.6×；然后将盛有菌体悬液的试管置于剂量0.5～2.0 KGy的辐照台面上，涂布培养72 h，吸取60Co‑γ射线照射后的样品稀释、涂布于0.4% 的干酪素培养基上；c）菌株筛选：c1) 将步骤b）的干酪素培养基在35℃避光恒温培养2～4 d，挑选其中HC值大于平均值的变异菌株，接入分离培养基斜面保存备用；HC值=透明圈直径/菌落直径；c2) 取步骤c1）得到的菌株，加入 1 mL 2 %的硫代硫酸钠作为解毒剂，培养基中 30℃培养 2d，然后利用福林酚法检测中性蛋白酶酶活力，选育出酸性蛋白酶酶活力提高值最大的为高产菌株。