[发明专利]一种蛋白定量检测方法

摘要

本发明涉及生物技术领域，为解决目前蛋白的快速实时检测中ELISA等检测方法复杂耗时费试剂的缺点、电化学检测方法的非特异性吸附和界面修饰等缺点，本发明提出了一种蛋白定量检测方法，将待测蛋白样本、调节探针、扩增模板、切口酶、DNA聚合酶、缓冲液、dNTPs、氯化镁、SYBR Green I荧光染料制成混合溶液，在等温条件下进行扩增反应，将待测蛋白浓度与等温扩增曲线的出峰时间之间建立定量关系，实现蛋白的实时定量检测。本方法具有简单、特异性高、通用性强和可以实时定量检测等优势，其检测限能达到亚纳摩尔级，可以满足一般的蛋白检测要求。

主权项

1.一种蛋白定量检测方法，其特征在于，所述的检测方法为将待测蛋白样本、调节探针、扩增模板、切口酶、DNA聚合酶、缓冲液、dNTPs、氯化镁、SYBR Green I 荧光染料制成混合溶液，在等温条件下进行扩增反应，将待测蛋白浓度与等温扩增曲线的出峰时间之间建立定量关系，实现蛋白的实时定量检测;调节探针的结构为一条寡核苷酸链构成的茎环结构或由两条寡核苷酸链杂交形成的复合结构；茎环结构调节探针由茎、环、5’侧臂、3’侧臂、待测蛋白特异性识别小分子组成，茎的一端与环连接，另一端分别与5’侧臂、3’侧臂连接，复合结构调节探针由茎、5’侧臂、3’侧臂、待测蛋白特异性识别小分子组成，茎的一端分别与5’侧臂、3’侧臂连接；调节探针的茎或茎环包含切口酶识别序列和非切口酶识别序列，切口酶识别序列靠近两侧臂端；调节探针上待测蛋白特异性识别小分子修饰在非切口酶识别序列上。