[发明专利]一种基因组目标区域测序的杂交捕获方法

摘要

本发明提供了一种基因组目标区域测序的杂交捕获方法，包括引物设计合成、文库构建和杂交捕获步骤，对杂交捕获进行了优化，操作简单，孵育时间适中，能够用于多种不同来源的DNA文库，有效降低捕获成本，提高捕获效率，缩短实验时间，适合基因组目标区域的测序。

主权项

一种基因组目标区域测序的杂交捕获方法，其特征在于，包括如下步骤：(一)探针设计合成根据基因组目标区域，以已知基因组序列为参考，以瓦片阵列的方式设计生成探针群，探针长度为100～120bp，并过滤掉高度重复探针，在探针两段加入通用引物，并合成作为探针模板，以此模板体外转录制备参入生物素标记核苷酸的探针；(二)文库构建按照插入片段大小为200～300bp构建DNA文库，文库浓度不低于15ng/μl；(三)杂交捕获1)分别配置文库混合液、杂交混合液和捕获混合液；2)PCR仪设定如下程序：95℃，5min；65℃，3min；65℃，2min；65℃，∞；3)放入文库混合液，开始程序第一步：95℃5min；4)到程序第二步65℃3min时，立即将杂交混合液放入；5)到程序第三步65℃2min时，立即将捕获混合液放入；6)到程序第四步后，在PCR仪上，将文库混合液、杂交混合液与捕获混合液混合；7)65℃杂交36个小时；8)用磁珠捕获步骤7)的杂交产物；其中，文库混合液含Human cot‑1、通用寡核苷酸、步骤(二)构建的文库和文库对应的blocker序列其中，杂交混合液由SSPE、EDTA、Denharts溶液及SDS混合制成；其中，捕获混合液为含步骤(一)所述探针和RNase抑制剂的溶液。