[发明专利]电致化学发光成像方法快速分析单细胞内成分的方法

摘要

本发明提供了一种电致化学发光成像方法快速分析单细胞内成分的方法利用，鲁米诺电致化学发光被首次应用于单细胞内生物分子(如葡萄糖)的检测。在检测过程中，单个细胞被直接定位在单个细胞大小的微洞电极；加入含有鲁米诺、曲通100和葡萄糖氧化酶的混合溶液后，曲通100可以破坏细胞膜，释放细胞内的葡萄糖到微洞中，和洞内的葡萄糖氧化酶反应生成过氧化氢；过氧化氢与鲁米诺反应在正电位下产生光信号。这种新发明的电化学发光测定方法将有可能被应用于对单细胞中更多的细胞内分子进行快速分析，以阐明细胞间的异质性。

主权项

1.一种电致化学发光成像方法快速分析单细胞内成分的方法，待检测的成分在对应的氧化酶的作用下催化产生双氧水，其特征在于，包括如下步骤：（1）提供表面具有若干微孔的氧化铟锡电极表面作为微电极，将该微电极作为工作电极与电化学工作站连接，银/氯化银和铂电极分别作为参比电极和辅助电极，通过电沉积将金纳米颗粒沉积到微电极的微孔表面；其中，所谓微电极表面设置有64‑256个用于容纳单个细胞的微孔；（2）以含有200‑500 μM L012的10‑20 mM PBS的混合溶液作为氧化铟锡片发光成像的溶液加入到微孔中，将待分析的单个细胞设置于微孔内，加入表面活性剂和待分析成分对应的氧化酶，使用电压发生器施加正负交替的电压在电极上诱使发光，然后使用电化学发光成像装置连续采集曝光时间为60s的两张照片，来收集来自细胞的发光信号；（3）使用Image J软件计算两个图像中发光强度的差异，同时为了校准来自ITO微孔处的发光差异，将50‑100 μM过氧化氢水溶液引入微孔内并对微孔发光的光强进行采集，在微电极的微孔内的单个细胞的发光强度和加入的过氧化氢收集到的发光强度的比率作为信号被用于细胞内成分的分析检测。