[发明专利]一种从发酵液中提取β-胸苷的方法

摘要

本发明公开一种从发酵液中提取β‑胸苷的方法，该方法包括以下步骤：（1）发酵液的预热；（2）发酵液的微滤；（3）微滤液的超滤；（4）超滤液的电渗析；（5）渗析液的浓缩；（6）浓缩液的层析；（7）层析液浓缩与结晶。本发明将膜分离技术、电渗析技术、层析分离技术运用于β‑胸苷发酵液的提取过程中，除杂效果好，工艺过程简便、环保，自动化程度高。通过本发明的提取工艺，β‑胸苷产品液相纯度≥98.5%，外标含量≥98.5，总收率≥70%，实现了从发酵液中提取β‑胸苷的工业化应用，具有良好的经济效益与产业化推广前景。

主权项

1.一种从发酵液中提取β‑胸苷的方法，其特征是该方法包括以下步骤：（1）发酵液的预热：β‑胸苷发酵液发酵结束后，在发酵罐内经蒸汽加热至60～85℃；（2）发酵液的微滤：β‑胸苷发酵液通过膜孔径为50nm～1000nm的滤膜，除去发酵液中的菌体及较大的蛋白及杂质颗粒，操作压力0.1～0.4MPa，操作温度10～50℃，浓缩倍数6～12倍，顶洗水量以体积百分比计占进料体积的50～80%；（3）微滤液的超滤：微滤液通过截留分子量为500～20000的滤膜，除去微滤液中的大部分蛋白及色素物质，操作压力0.5～2.0MPa，操作温度20～40℃，浓缩倍数10～20倍，顶洗水量以体积百分比计占进料体积的10～50%；（4）超滤液的电渗析：超滤液通过电渗析器，将超滤液中阴、阳离子型杂质分离；操作电压22V；（5）渗析液的浓缩：用真空浓缩方式对电渗析除离子后的物料进行浓缩，使胸苷的含量在20g/L～60g/L；浓缩温度控制在40～55℃，真空度达到0.08MPa～0.1MPa；（6）浓缩液的层析：将浓缩液采用离子交换树脂或大孔径吸附树脂进行层析，将胸苷与其它物质进行进一步分离，获得高纯度层析液；（7）层析液的浓缩结晶：将上述6个步骤处理后的层析液，经过浓缩、结晶，获得含量达到98.5%以上的β‑胸苷产品；以上实施方法的（2）、（3）、（4）步骤为发酵液的预处理，目的在于除去发酵液中的菌体、蛋白、大部分色素及阴阳离子；所述步骤（2）中的滤膜为氧化铝膜、陶瓷膜、PVC膜；所述步骤（3）中的滤膜为卷式超滤膜，卷式超滤膜的材料为醋酸纤维素膜、聚醚砜膜、聚偏氟乙烯膜、聚酰胺膜；所述步骤（4）中的电渗析三个储槽内溶液分别为：极液槽内为Na2SO4溶液；浓液槽内为自来水；清液槽内为超滤液；所述步骤（6）中的大孔径吸附树脂为：HZ‑803、HZ‑337、SD301、XD828；以上实施方法的（6）步骤为发酵液的高纯处理，目的在于进一步除去发酵液中的蛋白、多肽、核酸、色素、及微量的阴阳离子。